利用SpyTag-SpyCatcher技术开发靶向B7-H4/CD3/CD28的三特异性抗体抑制结直肠癌生长

《International Immunopharmacology》：A novel B7-H4/CD3/CD28 trispecific antibody with the SpyTag-SpyCatcher technology suppresses the growth of colorectal cancer

本研究成功开发了一种新型靶向B7-H4/CD3/CD28的三特异性抗体（TsAb），通过SpyTag-SpyCatcher技术构建。该抗体能特异性结合结直肠癌（CRC）细胞高表达的B7-H4抗原及T细胞表面的CD3/CD28，在体外和体内实验中均显示出显著的抗肿瘤活性，且未诱导人外周血单核细胞（PBMCs）产生过量炎症细胞因子，为CRC免疫治疗提供了新策略。

　　

Highlight

细胞培养

HEK-293T、DLD-1和LS174T细胞购自ATCC。HT29 (HTB-38) 和LoVo (CCL-229) 细胞系购自芬慧生物技术有限公司。Jurkat细胞 (CVCL_0065)，一种T细胞白血病系，购自武汉泽维尔生物技术有限公司。PBMCs (AP-050) 购自广州百瑞康生物技术有限公司。细胞培养在37°C、5% CO₂的湿润环境中进行。

噬菌体展示

采用噬菌体展示技术筛选B7-H4单链抗体（scFv）。

scFv-Fc抗体的构建

B7-H4-scFv-Fc抗体的结构设计如图1所示。经过每一轮淘选后，随机挑选96个克隆进行ELISA筛选（补充数据1：表S1，S2）。测序后，将11个样本克隆并插入真核表达载体pNFCG2人IgG2中（图1和补充数据1：表S3）。

筛选对B7-H4具有高亲和力的scFv-Fc抗体

流式细胞术显示，在HEK-293T或DLD-1细胞系中检测不到B7-H4，但在LS174T、HT29和LoVo细胞中含量丰富。

讨论

B7-H4在CRC细胞和组织中的表达显著高于正常细胞和组织。此外，B7-H4的表达与CRC的淋巴结转移和浸润深度呈正相关。然而，B7-H4在CRC中的临床意义仍存在争议，需要进一步深入探索。在我们的研究中，利用噬菌体展示方法创建了针对人B7-H4的特异性抗体（图1）。我们发现...

结论

总之，通过筛选鉴定出一种对B7-H4具有高亲和力的特异性抗体，命名为scFv-Fc 4。竞争性ELISA测试表明，肽序列SEQDEMFRGRT可能是scFv-Fc 4的抗原表位。利用scFv-Fc 4和SpyCatcher-SpyTag系统，我们开发了一种新型的三特异性抗体（TsAb-B7-H4）。我们的实验研究清楚地证明了TsAb-B7-H4对CRC细胞的抗肿瘤功效。