基于HPLC-酪氨酸酶在线筛选系统的异叶青兰酪氨酸酶调节剂发现：DFT计算、分子对接及体内活性研究

《Journal of Molecular Structure》：Functional constituents of Dracocephalum heterophyllum recognized by HPLC-tyrosinase: DFT calculation, molecular docking, and in vivo activity studies

本文创新性地构建了HPLC-酪氨酸酶在线筛选系统，实现了天然产物中酪氨酸酶调节剂的高通量精准识别。以异叶青兰为例，成功捕获咖啡酸（IC50=1.08 mM）、毛蕊花糖苷（EC50=0.24 mM）和迷迭香酸（IC50=0.41 mM）三种活性成分，并通过密度泛函理论（DFT）、分子对接及体内实验阐明其作用机制，为天然酪氨酸酶调节剂的开发提供了新技术平台。

　　

活性峰鉴定

HPLC-酪氨酸酶系统的运行原理基于配体诱导的蛋白质结合位点构象动力学。当小分子与酪氨酸酶结合时，内源性荧光团（主要是色氨酸和酪氨酸等芳香氨基酸残基）的微环境发生改变，从而调节其溶剂可及性和淬灭效率。此时荧光检测器捕获并记录该过程的特征荧光信号，实现活性成分的实时在线识别。

结论

本研究创新性地建立了一种在线HPLC-酪氨酸酶系统，通过实时监测目标蛋白荧光光谱变化，特异性识别天然产物中的生物活性小分子。在该平台指导下，从异叶青兰中识别并分离出三种酪氨酸酶调节剂：咖啡酸、毛蕊花糖苷和迷迭香酸。其中毛蕊花糖苷被鉴定为酪氨酸酶激活剂，而咖啡酸和迷迭香酸为抑制剂，其作用机制通过理论模拟和实验验证得以阐明。该研究为天然酪氨酸酶调节剂的发现提供了高效精准的技术平台。