G-CSF联合5-FU作为低毒性预处理方案在血友病B血小板靶向基因治疗中的突破性作用

《Blood Cells, Molecules, and Diseases》：Effects of G-CSF and 5-FU as conditioning regimens in platelet-targeted gene therapy for hemophilia B

本文系统评估了G-CSF（粒细胞集落刺激因子）和5-FU（5-氟尿嘧啶）作为非清髓性预处理方案在血友病B血小板靶向基因治疗中的协同作用。研究首次证实单次5-FU（150 mg/kg）联合G-CSF/plerixafor（普乐沙福）可通过创造短暂骨髓龛位空缺，实现供体造血干细胞（HSCs）稳定植入，使血小板特异性FIX Padua因子表达达到治疗水平，为血友病基因治疗提供了低毒性、高可行性的临床转化新策略。

　　

Highlight

本研究创新性地将G-CSF/plerixafor动员方案与定时5-FU给药相结合，成功实现血友病B小鼠模型中血小板靶向FIX因子的长期稳定表达。该策略通过精准调控造血干细胞（HSCs）龛位动态，为基因治疗提供了低毒高效的预处理新范式。

动物模型

血友病B（HB）小鼠模型采用杰克逊实验室提供的F9基因敲除鼠。2bF9-R338L转基因小鼠（具有HB背景且血小板储存FIX Padua因子）由本实验室前期构建，其FIX表达水平为10 mU/10⁸血小板。所有小鼠均采用C57BL/6背景，饲养于杭州师范大学动物中心的SPF级设施中。动物实验方案经机构伦理委员会批准。

G-CSF预处理效果评估

G-CSF作为最常用的HSCs动员剂，我们测试了其在血小板靶向基因治疗动物模型中的植入效果。HB小鼠皮下注射G-CSF（0.25 mg/kg）连续4天后，移植1×10⁸个来自2bF9-R338L转基因鼠的骨髓单核细胞（BM-MNCs）。移植后两周采集外周血DNA进行基因型分析...

讨论

本研究通过G-CSF、plerixafor和5-FU作为BMT预处理方案，以表达血小板靶向FIX的转基因小鼠为供体进行实验。预处理效果通过受体血小板FIX表达水平评估。在G-CSF预处理的HB小鼠中移植1×10⁸ BM-MNCs可实现长期HSCs植入与FIX持续表达，证实了动员式预处理用于血小板靶向基因治疗的可行性。值得注意的是，单次5-FU给药（150 mg/kg）在移植前1天使用即可达到最佳FIX表达与最小毒性，其成功关键在于创造了供体HSCs植入所需的瞬时龛位空缺。G-CSF/plerixafor联合定时5-FU的方案更可产生协同效应——G-CSF动员的HSCs对5-FU敏感性增强，而5-FU可特异性清除进入细胞周期的HSCs，二者结合显著提升了植入效率。这种基于动员的非清髓性预处理策略，为血友病等需部分HSCs嵌合治疗的疾病提供了临床转化新路径。

结论

（注：原文未提供具体结论内容，此处根据摘要和讨论部分提炼核心结论）

G-CSF联合定时5-FU的非清髓性预处理方案，能通过创造动态龛位空间实现供体HSCs高效植入，使血友病B小鼠获得长期治疗性FIX表达。该策略为血小板靶向基因治疗的临床转化提供了低毒性、高精准度的预处理新选择。