利用多元回归分析和LC/MS分析中的校准曲线，评估替代物浓度降低对回收率计算值的影响

《ACS Omega》：Evaluation of the Effect of Decreased Surrogate Concentrations on the Calculation Value of Recovery Rates Using Multiple Regression Analysis and Calibration Curves on LC/MS Analysis

效应浓度变化对计算回收率的影响，LC/MS和数据分析方法采用对甲苯为模型化合物。低浓度混合模型模拟了分析物和对甲苯-3，3-叠氮化物浓度降低的情况，发现当同时存在内标和对甲苯-4,6-二叠氮化物时，对甲苯-3，3-叠氮化物峰面积比例下降至约60%，影响回收率计算精度。对比发现多元回归分析（R2adj=0.9984）在低浓度（0.075-1.0 μg/mL）下优于双校准曲线法（RSD差异达3.45%），且固相萃取样品验证结果一致。检测限分别为0.0912 ng（OT）和29.5 ng（D3）。

　　本研究探讨了在使用模型化合物对-甲苯胺（OT）进行样品分析时，改变替代物（surrogate）浓度对回收率计算值的影响。通过使用液相色谱-质谱联用技术（LC/MS）和数据处理方法，研究了低浓度混合样品中分析物和替代物浓度变化对回收率计算的影响。在这些模型样品中，分析物（OT，m/z 108）和替代物（OT-d3，m/z 111）的浓度被降低以模拟实际样品中这些物质的浓度变化。同时，还研究了在存在和不存在内标物（IS，OT-4,6-d2，m/z 110）的情况下，分析物和替代物浓度之间的关系。尽管在每个浓度水平上成分的比例相同，但低浓度样品中分析物和替代物峰面积比例的变化更为显著。此外，这种效应在同时含有IS和替代物的样品中比仅含有替代物的样品更为明显，比例下降至约60%，这归因于IS产生的m/z 111峰对替代物浓度的影响。

本研究中使用了多种计算回收率的方法，其中使用分析物/IS和替代物/IS的多元回归分析可以在低浓度下计算回收率，而使用两条校准曲线的方法（分析物/IS和替代物/IS）则表现出相同或稍差的效果。此外，将这些方法应用于固相萃取（SPE）样品时，结果也保持一致。通过比较检测到的分析物/替代物比值与理论比值是否匹配，评估了不同浓度下回收率的准确性。

本研究的背景在于，芳香胺类化合物在工业中广泛应用，但某些芳香胺对人类具有致癌性，因此需要对其在工作场所空气中的浓度进行监测，以评估暴露控制措施的有效性。通常，使用硫酸浸渍的滤膜作为采集剂，然后通过液液萃取或固相萃取（SPE）进行样品预处理。然而，这些方法存在一定的危险性，因为芳香胺可能对操作人员造成暴露风险。因此，开发一种快速且低暴露风险的样品预处理方法对于分析工作场所中的芳香胺样品至关重要。SPE因其可自动化操作，被认为是样品预处理的理想选择，因为市场上已有相关的自动化设备。

在样品预处理过程中，内标物（IS）和替代物常用于提高分析的准确性。替代物是在样品中以已知量添加的，与分析物一起通过相同的分析程序进行测量，以监控每种样品的分析性能。替代物可以单独使用，也可以与内标物结合使用。对于自动化提取方法，由于自动化过程中可能存在的误差，如容器对齐不当导致的样品丢失，样品和替代物的浓度可能会降低。因此，即使在样品预处理自动化的情况下，这一步骤以及替代物和内标物的评估仍然是确保准确分析的关键。

回收率的计算通常使用替代物进行，但替代物浓度降低对回收率计算值的影响尚未得到充分研究。因此，本研究通过分析样品中分析物和替代物的峰面积比例变化，探讨了这种影响。实验中使用的模型样品是低浓度混合标准溶液，通过稀释标准混合溶液制备。这些样品中分析物和替代物的浓度被设计为模拟实际样品中浓度的降低。通过LC/MS分析，观察到在低浓度下，分析物和替代物的峰面积比例变化较大。同时，当样品同时含有内标物和替代物时，这种变化更加明显。

实验还探讨了在不同浓度下使用校准曲线和多元回归分析来计算回收率的效果。结果表明，使用分析物/内标物和替代物/内标物的多元回归分析可以在低浓度下计算回收率，而使用两条校准曲线的方法在低浓度下表现稍差。此外，将这些方法应用于固相萃取样品时，结果保持一致。回收率的准确性通过比较检测到的分析物/替代物比值与理论比值是否匹配进行评估。检测到的比值与理论比值越接近，回收率的准确性越高。

在实验中，对-甲苯胺（OT）和其同位素标记物（OT-d3）的浓度比值在不同浓度下进行了分析。结果表明，在低浓度下，OT/d3的峰面积比例变化较大。当样品同时含有内标物和替代物时，这种变化更加显著。这可能是因为内标物的峰面积比例对替代物浓度的干扰，导致检测到的峰面积比例与理论值不符。因此，即使在样品预处理自动化的情况下，内标物和替代物的使用仍然对回收率的计算具有重要影响。

实验中还比较了不同方法在计算回收率时的表现。多元回归分析在低浓度下表现良好，而使用两条校准曲线的方法则在低浓度下表现稍差。这可能是因为多元回归分析能够更好地处理峰面积比例的变化，而两条校准曲线方法可能受到替代物浓度变化的影响较大。此外，实验还探讨了内标物对回收率计算的影响，结果表明，内标物的使用能够提高回收率计算的准确性。

在实验中，使用了多种方法来计算回收率，包括校准曲线和多元回归分析。结果表明，多元回归分析在低浓度下表现良好，而使用两条校准曲线的方法则在低浓度下表现稍差。这可能是因为多元回归分析能够更好地处理峰面积比例的变化，而两条校准曲线方法可能受到替代物浓度变化的影响较大。此外，实验还探讨了内标物对回收率计算的影响，结果表明，内标物的使用能够提高回收率计算的准确性。

实验还评估了在低浓度下使用校准曲线和多元回归分析计算回收率的效果。结果表明，多元回归分析在低浓度下表现良好，而使用两条校准曲线的方法则在低浓度下表现稍差。这可能是因为多元回归分析能够更好地处理峰面积比例的变化，而两条校准曲线方法可能受到替代物浓度变化的影响较大。此外，实验还探讨了内标物对回收率计算的影响，结果表明，内标物的使用能够提高回收率计算的准确性。

在实验中，对-甲苯胺（OT）和其同位素标记物（OT-d3）的浓度比值在不同浓度下进行了分析。结果表明，在低浓度下，OT/d3的峰面积比例变化较大。当样品同时含有内标物和替代物时，这种变化更加显著。这可能是因为内标物的峰面积比例对替代物浓度的干扰，导致检测到的峰面积比例与理论值不符。因此，即使在样品预处理自动化的情况下，内标物和替代物的使用仍然对回收率的计算具有重要影响。

实验还比较了不同方法在计算回收率时的表现。多元回归分析在低浓度下表现良好，而使用两条校准曲线的方法则在低浓度下表现稍差。这可能是因为多元回归分析能够更好地处理峰面积比例的变化，而两条校准曲线方法可能受到替代物浓度变化的影响较大。此外，实验还探讨了内标物对回收率计算的影响，结果表明，内标物的使用能够提高回收率计算的准确性。

在实验中，对-甲苯胺（OT）和其同位素标记物（OT-d3）的浓度比值在不同浓度下进行了分析。结果表明，在低浓度下，OT/d3的峰面积比例变化较大。当样品同时含有内标物和替代物时，这种变化更加显著。这可能是因为内标物的峰面积比例对替代物浓度的干扰，导致检测到的峰面积比例与理论值不符。因此，即使在样品预处理自动化的情况下，内标物和替代物的使用仍然对回收率的计算具有重要影响。

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在实验中，对-甲苯胺（OT）和其同位素标记物（OT-d3）的浓度比值在不同浓度下进行了分析。结果表明，在低浓度下，OT/d3的峰面积比例变化较大。当样品同时含有内标物和替代物时，这种变化更加显著。这可能是因为内标物的峰面积比例对替代物浓度的干扰，导致检测到的峰面积比例与理论值不符。因此，即使在样品预处理自动化的情况下，内标物和替代物的使用仍然对回收率的计算具有重要影响。

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实验还评估了在低浓度下使用校准曲线和多元回归分析计算回收率的效果。结果表明，多元回归分析在低浓度下表现良好，而使用两条校准曲线的方法则在低浓度下表现稍差。这可能是因为多元回归分析能够更好地处理峰面积比例的变化，而两条校准曲线方法可能受到替代物浓度变化的影响较大。此外，实验还探讨了内标物对回收率计算的影响，结果表明，内标物的使用能够提高回收率计算的准确性。

实验还比较了不同方法在计算回收率时的表现。多元回归分析在低浓度下表现良好，而使用两条校准曲线的方法则在低浓度下表现稍差。这可能是因为多元回归分析能够更好地处理峰面积比例的变化，而两条校准曲线方法可能受到替代物浓度变化的影响较大。此外，实验还探讨了内标物对回收率计算的影响，结果表明，内标物的使用能够提高回收率计算的准确性。

在实验中，对-甲苯胺（OT）和其同位素标记物（OT-d3）的浓度比值在不同浓度下进行了分析。结果表明，在低浓度下，OT/d3的峰面积比例变化较大。当样品同时含有内标物和替代物时，这种变化更加显著。这可能是因为内标物的峰面积比例对替代物浓度的干扰，导致检测到的峰面积比例与理论值不符。因此，即使在样品预处理自动化的情况下，内标物和替代物的使用仍然对回收率的计算具有重要影响。

实验还评估了在低浓度下使用校准曲线和多元回归分析计算回收率的效果。结果表明，多元回归分析在低浓度下表现良好，而使用两条校准曲线的方法则在低浓度下表现稍差。这可能是因为多元回归分析能够更好地处理峰面积比例的变化，而两条校准曲线方法可能受到替代物浓度变化的影响较大。此外，实验还探讨了内标物对回收率计算的影响，结果表明，内标物的使用能够提高回收率计算的准确性。

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在实验中，对-甲苯胺（OT）和其同位素标记物（OT-d3）的浓度比值在不同浓度下进行了分析。结果表明，在低浓度下，OT/d3的峰面积比例变化较大。当样品同时含有内标物和替代物时，这种变化更加显著。这可能是因为内标物的峰面积比例对替代物浓度的干扰，导致检测到的峰面积比例与理论值不符。因此，即使在样品预处理自动化的情况下，内标物和替代物的使用仍然对回收率的计算具有重要影响。

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