利用一种可逆的CD36结合适配体快速且无标记地分离人类外周血单核细胞以实现细胞捕获

《Biomaterials Science》：Rapid and label-free isolation of human peripheral blood monocytes using a reversible CD36-binding aptamer for cell capture

高效低成本的aptamer靶向单核细胞分离方法 | CD36 | 磁珠分离 | 无标记 | 高纯度 | 免疫原性低 | 细胞功能保留

　　### 人类单核细胞的高效分离方法：基于CD36结合的适配体技术

单核细胞是一种重要的单核吞噬细胞，它们在机体的先天免疫系统中扮演关键角色。单核细胞来源于骨髓，并在血液中循环，随后迁移至炎症部位执行吞噬作用、抗原呈递和细胞因子产生等重要功能。这些细胞不仅在组织修复、细菌和病毒清除以及免疫监视中具有显著作用，还因其在癌症治疗和免疫细胞疗法中的应用潜力而受到广泛关注。例如，已有利用单核细胞衍生的树突状细胞和巨噬细胞进行细胞治疗的临床试验，针对多种疾病，包括癌症和中风。

然而，现有的单核细胞分离方法存在一些局限性。例如，塑料粘附法虽然成本低廉，但分离效率和纯度较低，常伴随较高的细胞污染风险，且可能诱导细胞激活，影响其后续分化能力。而基于磁珠的分离方法虽然能提供更高的纯度和产量，但需要昂贵的抗体试剂和专业设备，同时存在细胞激活和免疫反应的风险。因此，寻找一种成本更低、操作更简便、且能有效避免细胞激活和免疫反应的分离方法，成为当前研究的重点。

基于上述背景，研究人员开发了一种基于适配体的单核细胞分离技术，该方法利用CD36作为新的分离标志物，通过磁珠捕获和可逆的适配体释放策略，实现了高纯度、高产量的单核细胞分离。CD36是一种重要的模式识别受体，它不仅在单核细胞表面高表达，还参与多种免疫相关功能，如细菌清除和炎症反应调节。通过适配体与CD36的特异性结合，该方法能够在不破坏细胞表面受体的情况下高效分离单核细胞，从而避免抗体介导的激活和免疫反应。

在实验设计中，研究人员首先对CD36适配体的结合受体进行了鉴定。通过膜蛋白提取和适配体拉下实验，结合质谱分析和SDS-PAGE电泳，他们确认了CD36是适配体的主要结合目标。随后，他们优化了适配体与磁珠的结合条件，包括适配体浓度、磁珠体积以及洗脱缓冲液的组成，以确保分离的单核细胞具有高纯度和高活性。最终，他们选择了25 nM的适配体浓度、50 μL的磁珠体积以及含有0.5% BSA和1 mM EDTA的洗脱缓冲液，作为最佳分离条件。

在分离过程中，研究人员通过磁珠捕获和洗脱策略，将单核细胞从外周血单个核细胞（PBMCs）中高效分离出来。适配体与磁珠结合后，通过磁性柱分离，未结合的细胞进入流穿部分，而结合的细胞则留在磁性柱上，随后通过洗脱剂的加入实现释放。这种方法不仅避免了细胞表面的标记，还保持了细胞的天然状态，从而减少了细胞激活和免疫反应的风险。通过流式细胞术分析，研究人员发现使用CD36适配体分离的单核细胞具有较高的CD14和CD36表达水平，与使用抗体法分离的单核细胞相比，表现出更稳定的表型和功能。

此外，研究人员还评估了不同分离方法对单核细胞功能的影响。通过吞噬实验和TLR激动剂实验，他们发现使用适配体法分离的单核细胞在吞噬能力和炎症反应方面与抗体法分离的单核细胞相比具有优势。适配体法分离的单核细胞能够更有效地清除细菌，同时在面对TLR激动剂刺激时，表现出正常的细胞因子分泌能力。这表明，基于CD36的适配体分离方法不仅在分离效率上优于传统方法，还在细胞功能保持方面具有显著优势。

综上所述，这项研究提出了一种基于CD36结合的适配体磁珠分离技术，为单核细胞的高效分离提供了新的解决方案。该方法具有成本低、操作简便、无细胞激活风险等优点，有望在细胞治疗和免疫研究中发挥重要作用。未来，随着该技术的进一步优化和应用，可能会为更多基于单核细胞的疗法提供技术支持，推动免疫治疗的发展。