利用重编程技术构建CD163基因敲除诱导多能干细胞及其在PRRSV感染机制研究中的应用

《Theriogenology》：Construction of CD163-knockout induced pluripotent stem cells using reprogramming technology

本研究成功构建了CD163敲除的猪诱导多能干细胞（iPSC）模型，通过Tet-On慢病毒系统递送OSKM重编程因子（OCT4、SOX2、KLF4、c-MYC），证实该细胞系具有多能性标记物（NANOG、SALL4）高表达和胚体自发分化能力。该模型为深入研究PRRSV（猪繁殖与呼吸综合征病毒）的宿主互作机制及抗病毒策略开发提供了新型平台。

　　

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MEF和PAMFs的分离与富集

所有动物实验均遵循美国国立卫生研究院《实验室动物护理和使用指南》进行，并获西北农林科技大学动物护理与使用委员会批准。

从CD163基因敲除猪耳缘组织无菌采集样本，经75%乙醇表面消毒后使用PBS清洗三次。在无菌条件下分离真皮层组织，剪碎后依次用0.25%胰酶消化。

CD163敲除iPSC细胞系的建立

本研究通过双酶切获得5031bp的pOSKM片段和6395bp的载体骨架（图1A），经测序验证载体完整性。图1B展示了重编程实验技术路线，图1C记录了PAMFs在重编程过程中的形态变化：病毒转染五天后外源基因表达检测成功。

讨论

PRRS自20世纪80年代末爆发以来已成为全球养猪业的重大威胁。PRRSV主要靶向猪肺泡巨噬细胞，并通过CD163等受体介导感染。研究者通过CD163基因敲除、人源化改造以及SRCR5结构域氨基酸工程等手段，为猪抗病育种奠定了基础。本研究前期已成功构建CD163敲除猪模型用于PRRSV相关研究。

结论

本研究成功建立了CD163基因敲除的猪iPSC细胞系，该细胞系具备明确的多向分化潜能和基因编辑兼容性，不仅为PRRSV研究提供了关键资源，也为其他动物病毒性疾病的干细胞模型开发奠定了技术基础。