靶向LRP11-AS1通过调控miR-615-3p/AKT2轴抑制甲状腺乳头状癌生长的机制研究

《Translational Oncology》：Knockdown of LRP11-AS1 inhibits papillary thyroid tumor growth by modulating miR-615-3p/AKT2 axis

本研究针对甲状腺乳头状癌（PTC）患者预后差的问题，探讨了长链非编码RNA LRP11-AS1在PTC中的致癌作用。研究人员发现LRP11-AS1在PTC组织和细胞中显著高表达，其敲低可通过上调miR-615-3p抑制AKT2表达，进而抑制PTC细胞增殖、迁移和侵袭，并在裸鼠模型中证实其抑瘤效果。该研究揭示了LRP11-AS1/miR-615-3p/AKT2轴在PTC进展中的关键作用，为PTC诊断和治疗提供了新靶点。

　　

甲状腺癌作为最常见的内分泌系统恶性肿瘤，其中约85%的病例为甲状腺乳头状癌（PTC）。虽然大多数PTC患者预后较好，但仍有部分患者会出现局部复发和远处转移，导致临床预后不佳和生存率降低。BRAF^V600E作为PTC中最常见的遗传变异（约占45%），与复发风险和癌症相关死亡率增加密切相关。近年来，长链非编码RNA（lncRNA）在肿瘤发生发展中的作用日益受到关注，它们通过多种机制调控基因表达，成为癌症研究的新焦点。

在这项发表在《Translational Oncology》上的研究中，研究人员聚焦于一种新型lncRNA——LRP11-AS1（低密度脂蛋白受体相关蛋白11反义RNA1），探讨其在PTC发生发展中的作用机制。该研究通过临床样本分析、细胞实验和动物模型，系统阐述了LRP11-AS1通过miR-615-3p/AKT2轴促进PTC进展的分子机制。

研究人员采用的主要技术方法包括：临床样本分析（52对PTC组织及癌旁正常组织）、细胞培养与基因操作（瞬时敲低、稳定过表达）、RT-qPCR检测基因表达、Western blot检测蛋白表达、细胞功能实验（CCK-8增殖实验、克隆形成实验、Transwell迁移侵袭实验）、流式细胞术分析细胞周期、双荧光素酶报告基因验证分子相互作用，以及裸鼠移植瘤模型评估体内肿瘤生长。

研究结果部分：

LRP11-AS1在PTC组织和细胞系中过表达

研究人员发现LRP11-AS1在PTC组织中的表达显著高于癌旁正常组织，且BRAF^V600E突变病例中LRP11-AS1表达水平更高。生存分析显示，LRP11-AS1高表达患者生存概率显著降低。在细胞水平上，PTC细胞系（TPC1和BCPAP）中LRP11-AS1表达明显高于正常甲状腺上皮细胞Nthy-ori 3-1，其中携带BRAF^V600E突变的BCPAP细胞表达最高。

沉默LRP11-AS1抑制PTC细胞增殖

通过敲低和过表达实验证实，沉默LRP11-AS1可抑制PTC细胞增殖和克隆形成能力，而过表达LRP11-AS1则促进细胞增殖。这表明LRP11-AS1在PTC细胞生长中发挥重要作用。

敲低LRP11-AS1诱导PTC细胞G2期阻滞

细胞周期分析显示，敲低LRP11-AS1导致PTC细胞G2/M期阻滞，并伴随G2/M检查点蛋白cyclin B1的下调。这表明LRP11-AS1通过调控细胞周期影响PTC细胞生长。

敲低LRP11-AS1抑制PTC细胞迁移、侵袭和EMT

Transwell实验表明，敲低LRP11-AS1可抑制PTC细胞迁移和侵袭能力。同时，Western blot检测显示间质标志物N-cadherin和vimentin表达下调，p-AKT和p-mTOR磷酸化水平降低，表明LRP11-AS1通过调控上皮间质转化（EMT）过程影响PTC细胞转移能力。

LRP11-AS1通过靶向miR-615-3p调控PTC细胞生长和迁移

生物信息学预测和实验验证发现LRP11-AS1与miR-615-3p存在相互作用。miR-615-3p在PTC细胞中低表达，而敲低LRP11-AS1可上调miR-615-3p表达。双荧光素酶报告基因实验证实二者直接结合。功能回复实验表明，过表达miR-615-3p可逆转LRP11-AS1过表达对PTC细胞增殖、迁移和侵袭的促进作用。

AKT2是miR-615-3p的靶点且受LRP11-AS1调控

研究发现AKT2在PTC细胞中高表达，且是miR-615-3p的直接靶点。双荧光素酶报告基因实验证实miR-615-3p通过结合AKT2的3'-UTR抑制其表达。敲低LRP11-AS1可下调AKT2表达，而抑制miR-615-3p可恢复AKT2表达，表明LRP11-AS1通过miR-615-3p调控AKT2。

过表达AKT2逆转LRP11-AS1敲低的抗癌作用

回复实验显示，过表达AKT2可部分逆转LRP11-AS1敲低对PTC细胞增殖、克隆形成、迁移和侵袭的抑制作用，进一步证实LRP11-AS1通过miR-615-3p/AKT2轴发挥促癌作用。

LRP11-AS1敲低抑制体内PTC肿瘤生长

裸鼠移植瘤实验表明，敲低LRP11-AS1可显著抑制肿瘤生长，降低肿瘤重量。免疫组化分析显示，LRP11-AS1敲低组Ki67和AKT2阳性细胞面积减少，证实其在体内抑制肿瘤增殖的作用。

研究结论与讨论部分强调，LRP11-AS1在PTC中特别是BRAF^V600E突变病例中频繁过表达，通过吸附miR-615-3p解除对AKT2的抑制，从而促进PTC细胞增殖、迁移和侵袭。该研究首次揭示了LRP11-AS1/miR-615-3p/AKT2轴在PTC进展中的关键作用，不仅为理解PTC发病机制提供了新视角，也为开发新的诊断标志物和治疗靶点奠定了理论基础。特别是在BRAF^V600E突变型PTC中，LRP11-AS1可能成为有价值的预后指标和治疗靶标。

研究人员也指出研究的局限性，如皮下移植瘤模型未能完全模拟转移过程，以及LRP11-AS1与MAPK/ERK通路关系的直接证据有待进一步验证。未来研究可借助原位移植模型深入探讨LRP11-AS1在转移中的作用，并通过MAPK抑制剂处理等实验验证其转录调控机制。

该研究的发现为PTC特别是难治性PTC的治疗提供了新思路，LRP11-AS1有望成为新的生物标志物和治疗靶点，具有重要的临床转化价值。