开发并验证了一种用于大鼠血浆中Tirzepatide（一种双重GIP/GLP-1受体激动剂）的LC-MS/MS方法，以应用于药代动力学研究

《The Journal of Climate Change and Health》：Development and validation of an LC-MS/MS method for Tirzepatide, a dual GIP/GLP-1 receptor agonist, in rat plasma for application to a pharmacokinetic study

利伐他汀血浆浓度快速高灵敏度LC-MS/MS检测方法建立与验证，采用蛋白质沉淀技术提取，线性范围25-5000pg/mL，相关系数≥0.9980，精密度与回收率均符合要求，分析时间仅3分钟，成功应用于健康志愿者单剂量给药药代动力学及生物等效性研究。

　　

Maksim Dolov | Igor Rodin

俄罗斯莫斯科罗蒙诺索夫国立大学化学系

摘要

本文开发并验证了一种快速且高灵敏度的LC–MS/MS方法，用于测定人血浆中的利伐斯汀浓度。利伐斯汀从血浆中的提取采用了一种简单快捷的蛋白质沉淀技术（PPT）。内标物质为atazanavir-d₅。色谱分离使用YMC-Triart C18柱完成，随后通过质谱进行检测。监测的质量跃迁分别为：利伐斯汀的m/z 251.1?>?206.0，atazanavir-d₅的m/z 710.5?>?168.1。该方法包括快速血浆提取、梯度色谱分离和质谱检测，能够检测到每毫升亚纳克级别的利伐斯汀。该方法在25至5000?pg/mL的线性范围内具有良好准确性，相关系数至少为0.9980。日内和日间精密度及准确度均控制在15%以内。利伐斯汀和atazanavir-d₅的总回收率接近100%。每个样本的总分析时间仅为3分钟。该方法成功应用于26名健康志愿者单次口服1.5?mg（胶囊）后利伐斯汀的药代动力学参数测定。

引言

利伐斯汀是一种选择性乙酰胆碱酯酶和丁酰胆碱酯酶抑制剂，可减缓神经元产生的乙酰胆碱的降解，改善交感神经传导。该药物可选择性增加大脑皮层和海马区的乙酰胆碱含量，有助于改善胆碱能神经传导。利伐斯汀适用于治疗轻度至中度的阿尔茨海默病型痴呆以及与帕金森病相关的痴呆[1]。

利伐斯汀会引起多种副作用，其中恶心和呕吐的发生率非常高（≥10%）[1]。因此，为了降低副作用风险并减少健康志愿者退出研究的可能性，在生物等效性研究中建议使用最低注册剂量1.5?mg。根据国际人用药品技术要求协调委员会（ICH）的要求[2]，方法的定量下限（LLOQ）应确保能够检测到生物流体中药物浓度的至少5%（对于利伐斯汀而言为血浆中的浓度）。作者之前开发了一种测定人血浆中利伐斯汀的方法，该方法结合了最低的检测限、少量生物样本以及基于血浆蛋白沉淀的简单样品制备原理[3]。本文介绍了该方法的验证过程，验证结果表明该方法符合监管要求。

材料与试剂

纯度为99.8%的利伐斯汀酒石酸盐标准品购自USP参考标准品公司；内标物质（atazanavir-d₅，纯度≥95%）购自Toronto Research Chemicals公司。用于质谱分析的试剂为乙腈、甲醇、超纯水和甲酸，其他试剂至少为分析级。

标准溶液的制备

利伐斯汀储备溶液通过将准确称量的标准品溶解在甲醇中制备得到所需浓度。

方法开发

在开发过程中，选定了与基质成分兼容的最佳色谱分离参数以及质谱检测条件。样品制备原理选择为使用乙腈沉淀血浆蛋白这一最简单快捷的方法。具体开发条件已在先前的研究中详细描述[3]。先前发表的研究（表2）提供了HPLC-MS/MS方法的特性。

结论

本文开发并验证了一种用于测定人血浆中利伐斯汀的简单、快速且灵敏的方法。该方法具有最高的灵敏度（25?pg/ml），优于以往发表的类似方法。此外，样品制备采用简单的血浆蛋白沉淀技术，并且仅需使用少量生物样本。该方法成功应用于分析26名健康志愿者单次口服1.5?mg利伐斯汀后的药代动力学和生物等效性。

CRediT作者贡献声明

Maksim Dolov：概念设计、数据整理、形式分析、实验设计、项目管理、资源协调、方法验证、结果可视化、初稿撰写。 Igor Rodin：研究监督、文本审阅与编辑。

未引用参考文献

[10]

利益冲突声明

作者声明不存在可能影响本文研究的已知财务利益或个人关系。