哥斯达黎加郊狼（Canis latrans）螺旋丝虫病的回顾性研究：流行病学、病理学发现及Spirocerca lupi的分子特征分析

《Parasites & Vectors》：Retrospective study of spirocercosis in coyotes (Canis latrans) in Costa Rica: epidemiology, pathological findings, and molecular characterization of Spirocerca lupi

本研究回顾性分析1989-2024年39例中美洲狼尸检记录，发现84.6%存在Spirocerca lupi感染相关病变，包括主动脉瘤（84%）、食管 granuloma（66%）及首次报道的脊髓入侵。分子鉴定显示其18S rRNA和cox1基因序列与秘鲁安第斯狐及中美洲家犬高度相似，提示跨物种传播，强调狼在寄生虫传播链中的重要性及生态互动研究需求。

　　这项研究探讨了犬钩口线虫（*Spirocerca lupi*）在科斯塔黎加郊狼中的感染情况及其病理特征。犬钩口线虫是一种寄生虫，主要感染家犬和其他野生食肉动物，其生命周期涉及中间宿主和保虫宿主，对宿主的健康产生显著影响。研究者通过回顾性分析1989年至2024年间提交至科斯塔黎加国家大学兽医学院病理实验室的郊狼尸检记录，评估了与犬钩口线虫相关的病变，并结合分子生物学方法对线虫的基因片段进行鉴定，以进一步了解其在不同宿主间的传播动态。

研究发现，在39只郊狼中，有33只（占比84.6%）表现出与犬钩口线虫感染相关的病变，其中包括动脉瘤（占84%）、肉芽肿/结节（占66%）以及纤维肉瘤（占比低于1%）。动脉瘤是最常见的病变，且在这些动物中未观察到血管破裂或致命性血胸。此外，研究还记录了一例异常的线虫迁移病例，即线虫侵入脊髓腔，这是首次在郊狼中发现此类情况。通过粪便样本的分子检测，研究者发现4.6%的样本携带犬钩口线虫的DNA，表明该寄生虫在科斯塔黎加郊狼种群中存在一定的感染率。

从病理学角度来看，犬钩口线虫感染导致的病变在不同器官中表现出一致性。在动脉瘤中，血管壁明显增厚，主要由胶原纤维的增生引起，周围有大量巨噬细胞和中性粒细胞聚集。当线虫存在时，病变区域可见上皮样巨噬细胞、嗜酸性粒细胞和散在的淋巴细胞。在没有可见线虫的情况下，病变则表现为多发性液化性坏死（迁移痕迹）和大量巨噬细胞、退化的中性粒细胞及嗜酸性细胞碎片。食管结节通常位于黏膜层下方，形成一个与食管腔相连的瘘管，这些结节被纤维组织包裹，内部可见严重的肉芽肿和嗜酸性浸润。值得注意的是，在16只受影响的郊狼中发现了间质性肺炎，表现为弥漫性肺泡损伤、肺泡内中性粒细胞和巨噬细胞浸润以及II型肺泡细胞增生。

在分子分析方面，研究者从四只线虫样本中成功提取了18S rRNA基因序列，并发现这些序列与从圣基茨岛家犬中分离的犬钩口线虫完全一致。该序列被提交至GenBank，编号为PV460829。进一步的系统发育分析表明，这些序列与来自不同地区的犬钩口线虫样本形成一个紧密的簇，支持了犬钩口线虫在美洲野犬和家犬种群中广泛传播的观点。对于线虫的cox1基因片段，仅有一份序列被成功扩增，该序列与从秘鲁安第斯狐（*Lycalopex culpaeus*）中分离的犬钩口线虫样本（编号KY634870）高度相似，并被提交至GenBank，编号为PP930765。系统发育分析结果显示，科斯塔黎加郊狼样本与秘鲁安第斯狐和墨西哥、科斯塔黎加的家犬样本形成一个共同的进化分支，进一步说明了犬钩口线虫在美洲的广泛分布。

此外，研究者还对科斯塔黎加郊狼的粪便样本进行了分子检测，发现13份样本（占137份样本的38%）携带犬钩口线虫的DNA。这些样本均通过RFLP和12S metabarcoding方法确认为郊狼。研究指出，尽管犬钩口线虫在科斯塔黎加郊狼中的感染率相对较低，但其在多种组织中的持续存在表明该寄生虫已在该地区的野生食肉动物中建立了稳定的传播链。

研究还探讨了犬钩口线虫感染与病理及人口统计学变量之间的关系。通过卡方检验和Cramér’s V检验，研究者发现所有分析的病理变量均与犬钩口线虫感染显著相关。特别是，肉芽肿与线虫的出现具有高度相关性，表明线虫感染几乎总是伴随肉芽肿的形成，或反之。动脉瘤与肉芽肿之间也存在显著的关联。这些结果提示，犬钩口线虫感染在郊狼中可能处于慢性阶段，且长期感染可能增加肿瘤的发生风险。研究还提到，年龄与肿瘤之间存在统计学上的显著联系，表明慢性感染可能在宿主体内持续多年，最终导致病理变化。

犬钩口线虫的传播机制主要涉及两种途径：一种是宿主吞食携带线虫幼虫的鞘翅目昆虫（如粪食性甲虫），另一种是宿主通过摄食感染的中间宿主（如蜥蜴或鼹鼠）获得感染。研究指出，犬钩口线虫感染可能导致宿主出现多种病理变化，包括动脉瘤、肉芽肿和纤维肉瘤等。这些病变在不同宿主中表现出一定的差异，例如在野犬中，动脉瘤更为常见，而食管结节和肉瘤则较少见。这种差异可能与宿主的免疫反应和寄生虫的迁移路径有关，也可能受到宿主与寄生虫共进化历史的影响。

研究还提到，犬钩口线虫的传播方向尚不明确。虽然有假设认为犬钩口线虫可能从家犬传播到郊狼，但也有观点认为，郊狼可能作为寄生虫的宿主，维持其在野外的传播。此外，犬钩口线虫在美洲的分布可能受到人类活动的影响，例如郊狼的扩散和栖息地的变化。随着郊狼数量的增加和其在城市地区的出现频率上升，其与家犬之间的接触可能增加，从而提高犬钩口线虫在更广泛种群中的传播风险。

研究者强调，由于犬钩口线虫感染可能导致宿主出现慢性炎症反应，这种反应可能促进肿瘤的形成，特别是在食管或纤维肉瘤等部位。因此，了解感染的年龄和持续时间对于评估宿主的健康状况至关重要。同时，犬钩口线虫的感染可能对宿主的生存能力产生负面影响，特别是在长期感染的情况下，可能导致宿主的生理机能受损，甚至死亡。

为了更准确地识别犬钩口线虫，研究者建议结合分子生物学方法与传统的组织学分析。虽然组织学方法可以提供高度可靠的初步诊断，但某些线虫种类（如*Spirocerca vulpis*）在显微镜下与犬钩口线虫的形态相似，因此分子鉴定在确认寄生虫种类方面具有重要意义。此外，研究者指出，由于幼虫体积较小，难以在显微镜下直接观察，因此在尸检过程中，移除这些幼虫可能对组织造成损伤，影响病理报告的准确性。

研究还指出，犬钩口线虫感染在不同地区和宿主中的流行率存在差异。例如，在美国阿拉巴马州的农村犬中，犬钩口线虫的感染率高达47%，而在捷克共和国的犬中，感染率仅为0.2%。这种差异可能与宿主的饮食习惯、环境因素以及寄生虫的传播路径有关。在西班牙，*S. vulpis*在狐狸中的感染率仅为6%，进一步表明犬钩口线虫在不同宿主中的分布并不均衡。

从生态学角度来看，犬钩口线虫在郊狼中的感染情况提示了该寄生虫在野外传播的潜在风险。由于郊狼的活动范围扩大，特别是在城市公园等人类活动频繁的区域，它们与家犬的接触可能增加犬钩口线虫的传播机会。因此，对郊狼和家犬种群的持续监测对于评估犬钩口线虫的生态影响和传播风险具有重要意义。此外，研究者建议进一步探讨犬钩口线虫在不同宿主间的传播模式，以及其对宿主健康和生态系统的潜在影响。

综上所述，这项研究不仅揭示了犬钩口线虫在科斯塔黎加郊狼中的高感染率和多种病理表现，还通过分子生物学方法确认了该寄生虫的种类，并对其在美洲的传播路径进行了初步分析。这些发现对于理解犬钩口线虫在野生动物和家养动物之间的传播动态，以及制定相应的防控措施具有重要的科学价值。同时，研究也强调了持续监测和生态研究的重要性，以更好地评估犬钩口线虫对宿主种群和生态系统的潜在影响。