靶向黏着斑激酶（FAK）抑制恶性乳腺癌细胞迁移与非血管生成性血管化的研究

《Breast Cancer》：Targeting focal adhesion kinase inhibits cell migration and non-angiogenic vascularization in malignant breast cancer

本研究针对恶性乳腺癌中非血管生成性血管化（如血管生成拟态VM和血管共选VCO）导致的治疗耐药问题，通过体外实验和原位小鼠模型，首次揭示口服FAK抑制剂defactinib可通过抑制FAK磷酸化及其下游信号通路，显著降低癌细胞迁移能力与VM/VCO相关血管结构形成，进而抑制肿瘤生长。该研究为克服现有抗血管生成疗法耐药性提供了新策略，对临床治疗恶性乳腺癌具有重要转化价值。

　　

在恶性乳腺癌治疗领域，传统抗血管生成药物如贝伐珠单抗虽能暂时抑制肿瘤进展，却难以显著延长患者总生存期。其耐药机制与肿瘤通过非血管生成性血管化途径（如血管生成拟态和血管共选）维持血供密切相关。这类途径依赖癌细胞自身形成血管样结构或侵占宿主血管，规避常规抗血管生成治疗。尤其在三阴性乳腺癌和HER2阳性耐药乳腺癌中，非血管生成性血管化已成为肿瘤恶性进展的关键推手。然而，针对该过程的特异性疗法至今尚未突破临床瓶颈。

为此，日本大阪大学研究团队在《Breast Cancer》发表最新研究，首次聚焦黏着斑激酶在调控非血管生成性血管化中的作用。研究人员假设抑制FAK可通过阻断癌细胞迁移，间接破坏VM和VCO的形成。为验证此设想，他们采用HER2阳性耐药细胞JIMT-1和三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231，通过体外细胞迁移实验、延时显微镜观察和血管形成实验，结合小鼠原位移植瘤模型，系统评估FAK抑制剂defactinib的干预效果。

研究主要技术方法包括：Western blotting分析FAK/Y397磷酸化及下游信号分子表达；免疫荧光染色观察细胞骨架重塑；siRNA敲低FAK验证靶点特异性；体外血管形成实验量化VM能力；以及小鼠模型中进行组织化学染色评估肿瘤血管密度、细胞凋亡和增殖指标。

Defactinib抑制FAK及其下游组分，影响细胞骨架与运动性

研究发现，defactinib处理显著降低FAK/Y397及其下游效应蛋白P130Cas和paxillin的磷酸化水平，但不影响Src活性。通过免疫荧光染色可见，药物处理后癌细胞F-肌动蛋白纤维缩短，伪足形成受阻，细胞变圆且迁移能力下降。延时显微镜进一步证实defactinib抑制了细胞运动与血管样结构形成。

FAK抑制抑制乳腺癌细胞系中的管状形成

体外实验显示，defactinib以浓度依赖方式抑制JIMT-1和MDA-MB-231细胞的VM能力，IC₅₀分别为73.7 nM和152.0 nM，但对人脐静脉内皮细胞的正常血管生成无影响。通过siRNA敲低FAK重现了defactinib的抑制效果，证实FAK特异性参与VM调控。

Defactinib抑制小鼠乳腺癌模型中的肿瘤生长

小鼠原位移植瘤实验表明，口服defactinib（25 mg/kg，每日两次）显著抑制JIMT-1和MDA-MB-231肿瘤体积增长，且肿瘤组织肉眼观察血供减少。

Defactinib减少瘤内血管结构和非血管生成性血管化

组织学分析发现，defactinib治疗组肿瘤内血管样结构数量减少。通过多重免疫荧光染色标记人源SERPINE2（hSERPINE2）和小鼠血管标志物PECAM-1，发现药物组中VCO相关血管（即hSERPINE2阳性癌细胞包围的小鼠血管）数量及比例均显著下降，而VM结构在体内模型中未明显观察到。

Defactinib未显著增加细胞凋亡

TUNEL凋亡检测显示defactinib未诱导癌细胞凋亡水平升高，相反MDA-MB-231对照组凋亡更显著。但Ki-67增殖指数在药物组明显降低，表明肿瘤生长抑制主要源于增殖受限而非凋亡增加。

研究结论强调，FAK通过整合素-FAK-肌动蛋白通路调控细胞迁移，进而驱动非血管生成性血管化。Defactinib通过靶向该通路，在恶性乳腺癌中同时抑制VM和VCO，为克服抗血管生成治疗耐药提供了新方向。未来需进一步探索FAK抑制剂与现有疗法（如贝伐珠单抗）的联合策略，以优化临床获益。