双链Proofman-LMTIA技术快速检测大豆和小麦过敏原成分及其应用研究

《Food Bioscience》：Rapid Identification of soybean and wheat allergens using the duplex Proofman-LMTIA method

本文推荐一种结合梯形熔解温度等温扩增（LMTIA）与校正酶介导探针切割（Proofman）的新方法，可在30分钟内实现大豆（Lectin基因）和小麦（GAG56D基因）过敏原的同步快速检测。该方法灵敏度达10 pg/μL基因组DNA，检测限为5%过敏成分占比，优于传统LAMP法，为食品过敏原市场监管提供了高效技术支撑。

　　

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材料

大豆（Glycine max）、花生（Arachis hypogaea）、小麦（Triticum aestivum）、核桃（Juglans regia）、芝麻（Sesamum indicum）、腰果（Anacardium occidentale）和杏仁（Prunus dulcis）样品购自西营门超市（中国河南省许昌市）。穆兹利麦片、苏打饼干等商品购自本地市场。植物基因组DNA（gDNA）提取试剂盒购自天隆生化科技（西安）有限公司；Bst DNA聚合酶（ strand displacement activity）用于LMTIA扩增反应。

单重Proofman-LMTIA检测的温度优化

大豆单重Proofman-LMTIA反应体系在60°C、61°C、62°C和63°C下进行温度优化，小麦体系则在60°C、61°C和62°C下测试。如图2所示，阴性对照（DEPC-H₂O）在所有温度下均无扩增信号，而阳性对照在所有温度下均呈现扩增曲线。大豆检测在60°C和61°C时扩增效率较低、荧光信号弱；62°C时扩增速率最快且信号强度最高，故确定为最佳反应温度。小麦体系在62°C下同样表现出最优性能。

讨论

食物过敏是机体对特定食物成分的异常免疫反应，属于超敏反应（Hypersensitivity Reaction）范畴，临床可表现为皮肤瘙痒、喉头水肿及呼吸困难，严重时甚至引发过敏性休克。大豆和小麦作为八大主要食物过敏原之二，严重威胁成人与儿童健康。各国食品标签法规均要求明确标注过敏原信息，但加工过程中的蛋白质变性常导致传统免疫学方法（如ELISA）出现假阴性。本研究建立的Proofman-LMTIA技术通过靶向稳定的DNA序列，有效规避了蛋白变性的干扰，为热加工食品的过敏原监管提供了新策略。

结论

本研究建立的Proofman-LMTIA技术可在30分钟内实现大豆和小麦过敏原的快速、精准检测，具备优异的特异性、重复性、稳定性、灵敏度与检测限。所有受检商业食品样本中的过敏成分均被成功识别。该技术的推广应用将强化食品监管机构对含过敏原产品的监督效能，保障消费者健康安全。