B-AP15联合HSP90抑制剂Tanespimycin通过ROS介导的细胞毒性抑制肺癌细胞生长

《BMC Pharmacology and Toxicology》：Combination of B-AP15 and HSP90 inhibitor tanespimycin induces ROS-mediated cytotoxicity in human lung cancer cells

本研究针对晚期肺癌治疗疗效不足及耐药问题，探讨了HSP90抑制剂Tanespimycin(TAU)与去泛素化酶抑制剂B-AP15的协同抗肿瘤机制。结果表明，联合用药通过诱导ROS积累，激活JNK通路和内质网应激，显著增强对肺癌细胞的杀伤作用，为肺癌联合治疗提供了新策略。

　　

肺癌是全球癌症相关死亡的主要原因，尽管靶向治疗和免疫治疗取得了显著进展，但晚期肺癌患者的预后仍然很差。热休克蛋白90（HSP90）在稳定多种致癌蛋白中发挥关键作用，已成为肺癌等恶性肿瘤的潜在治疗靶点。然而，HSP90抑制剂的临床应用面临疗效不佳和耐药性等挑战。去泛素化酶抑制剂B-AP15通过抑制蛋白酶体途径的蛋白降解，在癌症治疗中显示出前景。本研究旨在探讨B-AP15与HSP90抑制剂Tanespimycin（TAU）在肺癌细胞中的联合活性。

研究人员采用Western blot分析检测特定分子水平，使用DCFH-DA探针测定活性氧（ROS）水平，通过免疫荧光评估53BP1焦点形成和CHOP表达，并利用mRFP-GFP-LC3慢病毒监测自噬流。实验使用H1299和H520人肺癌细胞系，通过Chou-Talalay法评估联合指数。

B-AP15和TAU协同抑制肺癌细胞增殖

研究发现，B-AP15和TAU联合使用比单一药物更有效地抑制H1299和H520细胞的增殖。当TAU浓度≥0.5μM时，联合指数（CI）值低于0.5，表明协同作用显著。联合治疗还显著提高了细胞内ROS水平，并增加了53BP1的核聚集，表明DNA损伤加剧。

ROS升高介导B-AP15和TAU的协同效应

使用抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸（NAC）预处理可有效逆转联合治疗引起的ROS积累和53BP1核聚集。NAC还显著恢复了联合治疗抑制的细胞活力，表明ROS升高是协同效应关键介质。

B-AP15和TAU联合对自噬的影响

联合治疗显著提高了LC3-II水平，增强了自噬流。NAC预处理逆转了LC3-II的上调，表明自噬激活是ROS依赖的。然而，自噬抑制剂3-MA并未显著挽救联合治疗引起的细胞死亡，提示自噬可能不是主要死亡机制。

B-AP15和TAU联合激活JNK信号通路

联合治疗显著提高了JNK在Thr¹⁸³/Tyr¹⁸⁵位的磷酸化水平。JNK抑制剂SP600125预处理逆转了JNK磷酸化并部分恢复了细胞活力。NAC预处理也显著逆转了JNK磷酸化，表明JNK通路激活由ROS积累介导。

B-AP15和TAU联合诱导肺癌细胞内质网应激

联合治疗显著提高了ATF4和CHOP水平，CHOP积累定位于细胞核。CHOP敲低显著减弱了联合治疗对细胞生长的抑制。NAC预处理逆转了ATF4和CHOP的升高以及CHOP核聚集，表明内质网应激由ROS积累驱动。

本研究提供了有力证据支持TAU与B-AP15联合作为肺癌治疗可行方案的潜力。联合治疗通过ROS积累诱导DNA损伤，激活JNK通路和内质网应激，最终导致细胞死亡。尽管自噬被激活，但它不直接参与细胞死亡过程。该研究为克服HSP90抑制剂耐药性提供了新思路，强调了靶向多信号通路在癌症治疗中的重要性。

该研究的主要局限性在于仅使用了体外细胞系模型，缺乏体内动物模型和患者来源数据的验证。未来需要进一步研究联合治疗的体内疗效、最佳剂量和潜在毒性，并与现有临床药物进行比较，为其临床应用提供更坚实的基础。