整合网络药理学与实验验证：通过阻断PI3K/AKT-MAPK通路实现多靶点协同作用，对抗多重耐药的肺炎克雷伯菌

《Naunyn-Schmiedeberg's Archives of Pharmacology》：Integrative network pharmacology and experimental validation of multi-target synergy against multidrug-resistant klebsiella pneumoniae via PI3K/AKT-MAPK pathway disruption

多重耐药克雷伯菌的中药复方协同作用机制研究揭示槲皮素、黄芩素和山柰酚通过靶向PI3K/AKT及MAPK通路抑制生物膜形成并降低炎症因子释放，为安全多靶点治疗耐药感染提供新策略。

　　

摘要

多重耐药肺炎克雷伯菌（MDR-KP）感染是全球性的健康危机，其对最后一线抗生素的耐药性正在不断上升。传统中药（TCM）对耐药病原体具有多组分协同作用。本研究通过整合药理学和实验验证，揭示了具有抗菌活性的中药成分针对MDR-KP的抗菌机制。通过《中国药典》和TCMSP数据库筛选了四种核心中药（黄芩、连翘、金银花、芦荟）。网络药理学确定了核心成分并丰富了相关通路。对临床分离出的MDR-KP菌株（对美罗培南、多粘菌素E和替加环素具有耐药性）进行了表征。利用棋盘实验、生物膜定量和膜通透性测定评估了其协同效应。分子对接和RT-qPCR分析了靶点相互作用，而ELISA和CCK-8则评估了抗炎活性和细胞毒性。结果表明，木犀草素、吴茱萸素和山柰酚是关键成分，它们作用于PI3K/AKT和MAPK通路。这三种成分的联合使用（浓度为2/4/8 μg/mL）表现出显著的协同作用（FIC = 0.38），使生物膜生物量减少了68%（p < 0.001），并将细胞外多糖厚度从15.1 μm降低到3.1 μm（p < 0.001）。流式细胞术证实膜通透性增加了144.8%。分子对接显示它们与PI3K（-6.78 kcal/mol）、AKT1（-6.60 kcal/mol）和MAPK1（-7.24 kcal/mol）具有高亲和力结合，RT-qPCR显示这些基因的表达显著下调（p < 0.001）。该组合在治疗浓度下可抑制LPS诱导的TNF-α和IL-6释放，分别降低了72%和65%，同时保持95.5%的细胞存活率。总之，本研究揭示了木犀草素-吴茱萸素-山柰酚针对MDR-KP的三重作用机制，能够同时破坏耐药性通路、生物膜和过度炎症。这种联合疗法为对抗耐药性感染提供了一种安全的多靶点治疗策略。