采用UHPLC-Q-Orbitrap-MS技术对右京颗粒中的化学成分及被血液吸收的成分进行了分析

《Analytical Science Advances》：Analysis of Chemical Components and Blood-Absorbed Components in Youjing Granules by UHPLC-Q-Orbitrap-MS

中药Youjing Granules (YG)的化学成分及血液吸收研究。采用UHPLC-Q-orbitrap-MS技术鉴定出132种化学成分，包括黄酮类（29种）、prenol脂类（25种）、有机氧化合物（18种）等。实验显示24种成分进入血液，含15种原型成分（如loganic acid、geniposidic acid）和9种代谢物（如glucuronidation产物）。该研究为明确YG治疗男性不育的药效物质基础提供了依据，

　　### 化学成分分析与血浆吸收研究

Youjing颗粒（YG）是一种传统中药方剂，广泛用于治疗男性不育症。随着现代医学的发展，男性不育症的发病率持续上升，对生殖健康构成了重大威胁。本研究通过使用超高液相色谱与混合四极杆-轨道阱高分辨率质谱（UHPLC-Q-Orbitrap-MS）技术，对YG的化学成分进行分析，并鉴定其在大鼠血浆中的吸收成分。研究旨在为YG的药理作用机制提供参考依据。

#### 研究背景

男性不育症的病因复杂，包括生理和遗传因素、行为生活方式、环境影响以及社会人口风险等。现有的治疗方法如药物治疗、手术和辅助生殖技术（ART）存在一定的局限性和风险，且效果不理想。例如，ART的单次周期成本较高，临床妊娠率较低，且可能引发如卵巢过度刺激综合征等并发症。相比之下，传统中药在治疗男性不育症方面具有独特的优势，其整体治疗理念能够有效应对功能障碍，展现出广泛的应用前景。

YG是一种基于补肾、化湿、活血和清热原理的中药复方，由多种中药组成，如黄芪、玉竹、菟丝子等。其疗效和作用机制已在前期研究中得到验证，初步研究表明YG可以上调精子干细胞（SSCs）中与自我更新和增殖相关的分子表达，如神经营养因子和成纤维细胞生长因子-2，有助于改善精子质量和保护生精功能。然而，由于中药复方成分复杂，其药理作用往往来源于多种活性成分的协同作用，因此需要进一步明确YG中具体哪些成分对其疗效产生关键影响。

#### 材料与方法

研究中使用的仪器包括Vanquish Flex超高液相色谱仪和Q Exactive混合四极杆-轨道阱质谱仪，均来自Thermo Fisher Scientific。色谱柱为ACQUITY UPLC HSS T3反相色谱柱，柱温设定为40°C，流动相为水（含0.1%甲酸）和乙腈。实验采用12只SPF级雄性SD大鼠，体重在220-250克之间，实验条件为温度23-26°C，相对湿度45%-55%，光照周期为12小时。实验方案通过扬州大学伦理委员会批准。

在实验过程中，YG组的大鼠接受0.2 g/mL浓度的YG溶液，剂量为10 mL/kg，每天两次，连续三天。空白组则接受等量的蒸馏水。实验结束后，从大鼠腹主动脉采集血液样本，并在最后一次给药后1小时进行分析。

#### 化学成分分析

通过UHPLC-Q-Orbitrap-MS技术，研究人员对YG进行了全面的化学成分分析。分析结果表明，YG中含有132种化学成分，主要成分包括黄酮类、类萜醇类、有机氧化合物、异黄酮类、类固醇和其衍生物，以及香豆酸和其衍生物。这些成分的鉴定基于保留时间、精确分子量和二级质谱碎片与文献数据和参考物质的比较。

黄酮类化合物是YG中的主要成分之一，其中23种属于黄酮糖苷。在负离子模式下，黄酮类化合物容易形成[M - H]^-准分子离子。在质谱碎片化过程中，糖苷键断裂频繁，失去葡萄糖或鼠李糖分子，生成苷元碎片离子，如[M - H - Glc]^-或[M - H - Rha]^-。这些苷元碎片随后经历中性分子的损失，如CH3、CO、H2O和CHO等。

#### 血浆吸收成分分析

通过比较YG样品、含药血浆样品和空白血浆样品的BPI色谱图，研究人员鉴定了24种在血浆中被吸收的成分，包括15种原型成分和9种代谢产物。具体而言，CQZ贡献了三种成分：geniposidic acid、8-epi-loganic acid和plantainoside D；XD提供了四种成分：loganic acid、sweroside、loganin和asperosaponin F；MDP贡献了三种成分：sweroside、paeonoside和paeoniflorin；SYZ提供了四种成分，包括vicenin I、7-O-methyl luteolin-6-C-β-d-glucoside、3,4′-O-dimethyl ellagic acid和rhamnocitrin；HQ贡献了两种成分：vicenin I和rhamnocitrin。此外，sweroside存在于BJ中，vicenin I还存在于CBZ、BMG和SCP中，paeoniflorin则进一步被发现存在于FL中。

通过比较图示7和表1，研究人员分析了YG的潜在代谢途径，并根据质谱碎片化模式鉴定了代谢产物。共鉴定出九种代谢产物，其中M1、M3和M8属于相I代谢产物，M2、M4、M5、M6、M7和M9属于相II代谢产物。例如，M6被鉴定为formononetin的葡萄糖醛酸化产物，其准分子离子在负离子模式下为[M - H]^-，分子式为C22H20O10。通过比较M6的特征碎片离子与原型成分formononetin的碎片离子，研究人员确认了M6的代谢途径。

#### 讨论

目前，男性不育症影响了8%-12%的育龄夫妇，男性因素直接导致或参与了约50%的病例。男性不育症患者常表现出射精量减少、精子浓度降低或精子活力下降等临床特征，给许多家庭带来巨大的身心负担。大多数中医学者认为肾精亏虚是男性不育症的病因，历代医家一直认为补肾是治疗的基础，同时调节心、脾和肺。YG采用补肾与化湿、活血和清热相结合的方法，其中SYZ具有温性，味甘，作用于肝和肾经，具有温补肝肾、减少尿频和缓解白带的功能。其提取物显著降低了生精功能障碍动物的精子畸形指数，提高了大鼠的精子质量，增加了血清睾酮水平，降低了促卵泡激素，并表现出显著的促进生精作用。CQZ和TSZ是治疗弱精症的核心成分，与其他成分配合，显示出显著的补肾、促进生精和激活精子活力的效果，从而增强精子运动能力和提高前向运动精子数量。

#### 结论

本研究通过UHPLC-Q-Orbitrap-MS技术，对YG的化学成分、血浆吸收原型成分和代谢产物进行了系统分析，为进一步研究YG的药理作用机制提供了理论依据。YG的化学成分和血浆吸收成分的鉴定不仅有助于理解其药理作用的基础，也为中药现代化研究提供了重要参考。