车叶草苷通过mTOR介导的自噬通路改善肝损伤的代谢组学机制研究

《Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis》：The protective effect of asperuloside on liver injury: insights from metabolomics and the mTOR-mediated autophagy perspective

本文发现车叶草苷（ASP）可通过抑制p-mTOR激活自噬通路，显著改善LPS诱导的肝细胞氧化应激（ROS）和炎症因子（TNF-α、IL-6）释放，并通过UPLC-Q-Orbitrap MS技术揭示23种与丙氨酸-天冬氨酸-谷氨酸代谢、花生四烯酸代谢相关的生物标志物，为急性肝损伤（ALI）治疗提供新靶点。

　　

亮点

材料与试剂

ASP（纯度≥98%）购自蔚科奇生物科技有限公司（成都），地塞米松磷酸钠（DSP）（纯度≥98%）和雷帕霉素（RAPA）（纯度≥99%）购自源叶生物科技有限公司（上海）。ROS、LDH、CCK-8、JC-1、ALT、AST和BCA蛋白检测试剂盒均购自索莱宝科技有限公司（北京）。Mdivi-1（纯度≥98%），mTOR、磷酸化mTOR（p-mTOR）、p62、Beclin1、β-肌动蛋白（β-actin）的一抗（兔源）及HRP标记二抗均用于实验。

ASP对LPS诱导的AML12细胞损伤的影响

ASP的化学结构如图1A所示。CCK-8实验结果表明，ASP（0-120 μM）在24小时内对AML12细胞无毒性作用（图S3）。LPS组显著升高LDH水平，表明细胞损伤。低剂量和高剂量ASP均显著抑制乳酸脱氢酶（LDH）的释放（图1B）。此外，LPS显著增强炎症因子TNF-α和IL-6的分泌。

结论

本研究表明，ASP可激活自噬，抑制LPS诱导的氧化应激和炎症水平，并改善肝损伤的病理状况。此外，采用UPLC-Q-Orbitrap MS技术对肝组织进行分析，探讨ASP在LPS所致肝损伤中影响特定代谢途径的机制。ASP干预后，23种潜在生物标志物呈现不同程度的恢复。这些标志物可能与自噬调控存在关联。