JTE-013通过调控TRAF2/NF-κB/IGF-1信号通路和巨噬细胞极化减轻炎症与肺纤维化

《International Immunopharmacology》：JTE-013 reduces inflammation and improves pulmonary fibrosis by regulating the TRAF2/NF - κB/IGF-1 signaling pathway and macrophage polarization

本研究揭示了选择性S1PR2拮抗剂JTE-013通过干预S1P-S1PR2信号轴，调控下游TRAF2/NF-κB/IGF-1通路平衡巨噬细胞M1/M2极化，显著改善博来霉素诱导的小鼠肺纤维化病理进程，为靶向巨噬细胞免疫调控的纤维化疾病治疗提供了新策略。

　　

亮点

JTE-013通过减轻BLM诱导的巨噬细胞M1极化来缓解肺部炎症

基于参考文献[46]中报道的类似实验模型，并结合我们课题组对相同实验对象进行的预实验，5 mg/kg的BLM剂量不仅能保证实验效果的显著性，还能使动物模型的安全性指标更佳。本研究首先选取30只C57BL/6小鼠，随机分为五组：对照组、BLM组、BLM + JTE-013 (3 mg/kg)组、BLM + JTE-013 (10 mg/kg)组以及BLM + JTE-013 (30 mg/kg)组。通过气管内滴注BLM建立肺纤维化模型。如图1A所示，在BLM滴注后第1天开始腹腔注射JTE-013，持续14天。我们发现，与对照组相比，BLM组小鼠的肺部出现明显的炎症细胞浸润和肺泡结构破坏。然而，JTE-013治疗显著减轻了这些病理变化，且呈现剂量依赖性改善（图1B）。通过免疫组织化学染色检测M1巨噬细胞标志物iNOS的表达，结果显示BLM刺激后iNOS阳性细胞数量显著增加，而JTE-013治疗则剂量依赖性地减少了iNOS阳性细胞的数量（图1C, D）。此外，我们还通过酶联免疫吸附试验检测了支气管肺泡灌洗液中促炎细胞因子肿瘤坏死因子-α和白细胞介素-6的水平。与对照组相比，BLM组小鼠的肿瘤坏死因子-α和白细胞介素-6水平显著升高，而JTE-013治疗则剂量依赖性地降低了这些细胞因子的水平（图1E, F）。这些结果表明，JTE-013能够有效减轻BLM诱导的肺部炎症，其机制可能与抑制巨噬细胞向M1表型极化有关。

JTE-013通过抑制BLM诱导的巨噬细胞M2极化来缓解肺纤维化

为了研究JTE-013对肺纤维化过程中巨噬细胞M2极化的影响，我们检测了M2巨噬细胞标志物CD206和精氨酸酶-1的表达。免疫组织化学染色结果显示，与对照组相比，BLM组小鼠肺组织中CD206和精氨酸酶-1阳性细胞数量显著增加。然而，JTE-013治疗剂量依赖性地减少了CD206和精氨酸酶-1阳性细胞的数量（图2A-D）。同时，我们还发现JTE-013治疗显著降低了肺组织中促纤维化介质转化生长因子-β和α-平滑肌肌动蛋白的表达水平（图2E, F）。这些数据表明，JTE-013能够抑制BLM诱导的巨噬细胞M2极化，从而减轻肺纤维化进程。

JTE-013通过调节S1P-S1PR2信号通路影响巨噬细胞极化

为了进一步阐明JTE-013调控巨噬细胞极化的分子机制，我们在体外培养了小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞，并用S1P刺激细胞，同时加入不同浓度的JTE-013进行处理。通过蛋白质印迹法检测S1PR2、肿瘤坏死因子受体相关因子2、核因子κB磷酸化水平以及胰岛素样生长因子-1的表达。结果显示，S1P刺激显著上调了S1PR2、肿瘤坏死因子受体相关因子2、磷酸化核因子κB以及胰岛素样生长因子-1的表达。然而，JTE-013处理剂量依赖性地逆转了S1P诱导的这些蛋白表达上调（图3A-E）。此外，通过小干扰RNA敲低肿瘤坏死因子受体相关因子2的表达后，我们发现S1P诱导的核因子κB磷酸化和胰岛素样生长因子-1表达上调被显著抑制（图3F-H）。这些结果提示，JTE-013可能通过拮抗S1P-S1PR2信号通路，进而抑制下游肿瘤坏死因子受体相关因子2/核因子κB/胰岛素样生长因子-1轴来调控巨噬细胞极化。

JTE-013通过调节巨噬细胞极化平衡来改善肺纤维化

为了验证JTE-013是否通过调节巨噬细胞极化平衡来改善肺纤维化，我们检测了JTE-013对BLM诱导的小鼠肺纤维化模型中细胞外基质沉积的影响。马松三色染色结果显示，BLM组小鼠肺组织中出现明显的蓝色胶原纤维沉积，而JTE-013治疗显著减少了胶原沉积的面积（图4A, B）。同时，羟脯氨酸含量测定也显示JTE-013治疗剂量依赖性地降低了肺组织中胶原蛋白的含量（图4C）。这些结果表明，JTE-013能够有效减轻BLM诱导的肺纤维化，其机制可能与调节巨噬细胞M1/M2极化平衡，进而减少细胞外基质过度沉积有关。

结论

我们的研究结果表明，JTE-013通过靶向S1P–S1PR信号通路并调节下游肿瘤坏死因子受体相关因子2/核因子κB/胰岛素样生长因子-1的活性，从而恢复巨噬细胞M1/M2平衡并减少细胞外基质沉积，进而减轻肺纤维化。从机制上讲，JTE-013与S1PR2结合后，通过抑制肿瘤坏死因子受体相关因子2破坏了肿瘤坏死因子信号转导，导致核因子κB磷酸化和核转位被抑制。此外，肿瘤坏死因子受体相关因子2敲低实验证实了其对于胰岛素样生长因子-1表达的必要性，