拉米夫定遗留效应与HBV相关肝癌中HBs截短突变体克隆选择的探索性分析

《Infectious Agents and Cancer》：Exploratory analysis of lamivudine legacy and clonal selection of HBs truncation mutants in HBV-related hepatocellular carcinoma

本研究针对核苷(酸)类似物(NA)治疗无法消除HBV整合体及cccDNA持续存在导致肝癌发生的临床难题，通过分析4例HBV相关肝细胞癌(HCC)患者（含2例拉米夫定经历史）的血清、癌及癌旁组织标本，发现拉米夫定暴露患者肿瘤组织中特异性富集sW172/sW182等HBs截短突变体，提示早期低屏障NA治疗可能通过整合DNA遗留致癌突变，为病毒完全抑制患者提供新型HCC风险分层生物标志物。

　　

在慢性乙型肝炎(CHB)的长期管理过程中，核苷(酸)类似物(NA)的应用虽能有效抑制病毒复制，却无法彻底清除肝细胞内的共价闭合环状DNA(cccDNA)——这个顽固的病毒"储藏库"持续转录病毒RNA，成为肝癌发生的潜在推手。更棘手的是，病毒基因整合到宿主染色体后，可能产生截短的乙肝表面抗原(HBs)蛋白，这些变异体已被证实具有致癌潜力。尤其值得关注的是，早期广泛使用的拉米夫定因其低耐药屏障，可能加速这类致癌突变体的产生，即使后续换用高效药物如恩替卡韦，这些"遗留"的整合突变仍可能潜伏体内，伺机而动。

为探究这一临床难题，Chu等人在《Infectious Agents and Cancer》发表研究，通过对比分析有/无拉米夫定暴露史的肝癌患者样本，揭示了过去治疗经历对当前肝癌风险的潜在影响。研究人员创新性地将目光投向病毒抑制状态下依然活跃的转录本，试图解答：这些整合DNA衍生的截短突变是否在肿瘤发生中扮演特殊角色？它们是否会成为肝癌早期预警的新靶标？

研究团队采用多组学技术路径，重点包括：从林口长庚纪念医院生物样本库获取4例接受肝癌切除术患者的配对血清、肿瘤及癌旁组织；通过Hirt法分离提取肝组织染色体外DNA并采用肽核酸(PNA)钳制实时定量PCR特异性检测cccDNA；利用下一代测序(NGS)技术对血清DNA、组织cccDNA及组织RNA来源的HBs基因进行深度测序分析；通过对比不同组织 compartment 中突变分布模式，探索截短变异体的克隆选择特征。

患者临床特征与样本收集

研究纳入4例接受恩替卡韦治疗的HBV相关肝癌患者，其中2例有拉米夫定暴露史。通过收集手术切除时的配对组织与血清标本，结合回顾性临床资料分析，建立了涵盖治疗史、病毒学标志物和病理特征的完整数据集。所有患者均呈现病毒学抑制状态，为准确解析整合DNA来源的转录本创造理想条件。

拉米夫定暴露患者中HBs截短突变的独特分布模式

在既往接受拉米夫定治疗的病例中观察到显著突变富集现象。患者1在停用恩替卡韦4个月后确诊肝癌，其12年前的拉米夫定治疗史与肿瘤组织中sW182突变率达99.5%密切相关。值得注意的是，该突变在癌旁组织RNA中仅占2.29%，显示肿瘤微环境对特定突变体的强烈选择压力。患者2在持续恩替卡韦治疗期间确诊肝癌，其癌旁组织存在sW172(7.5%)和sW196(34.9%)两种突变，而肿瘤组织仅检测到sW172且频率升至55.0%，再次印证克隆选择的存在。

恩替卡韦单药治疗患者未见截短突变

与拉米夫定暴露组形成鲜明对比的是，单纯接受恩替卡韦治疗的患者3和患者4在所有检测样本中均未发现HBs截短突变。尽管这两例患者肝细胞内同样存在cccDNA且最终发展为肝癌，但其突变谱系明显区别于有早期低屏障药物治疗史的病例，提示高遗传屏障药物可能降低致癌突变体的产生风险。

截短突变在肿瘤中的克隆富集及其意义

综合分析显示，拉米夫定暴露组肿瘤组织呈现突变谱系"纯化"现象——尽管癌旁组织存在多种截短突变，但肿瘤区域仅特异性富集单个优势突变株。这种克隆选择模式强烈提示sW172和sW182等特定变异体可能赋予肝细胞生长优势。分子溯源发现这些突变体主要源自整合的HBV DNA而非cccDNA，且其转录本因结构缺陷无法参与病毒组装，故不会出现在血清病毒颗粒中，这解释了为何常规病毒学监测难以捕捉其存在。

本研究通过精密的分子分型技术，首次在临床标本中证实抗病毒治疗史与HBV整合突变体克隆选择的关联性。研究揭示拉米夫定等低屏障药物可能通过选择性压力促使整合DNA携带致癌性HBs截短突变，这些突变体在后续高屏障药物治疗期间保持转录活性，并在肝癌发生过程中经历克隆选择。特别值得注意的是sW172和sW182等变异在肿瘤组织中的特异性富集，为理解病毒整合体在肝癌演进中的作用提供新视角。尽管恩替卡韦单药治疗患者未检出类似突变，提示高遗传屏障药物的保护效应，但肝癌的最终发生也警示我们致癌途径的多样性。这些发现不仅深化了对"病毒学治愈"后肝癌发生机制的认识，更为优化长期随访策略提供重要线索——对于有早期低屏障药物治疗史的患者，即使实现病毒学抑制，仍需要加强针对整合DNA衍生转录本的监测。该研究开创性地将治疗史、病毒突变与克隆演化相联系，为开发新型生物标志物和精准防治策略奠定理论基础。