Nafamostat mesilate 通过抑制 IL-17 信号通路来减轻肾纤维化

《Frontiers in Pharmacology》：Nafamostat mesilate attenuates renal fibrosis by suppressing the IL-17 signaling pathway

慢性肾脏病（CKD）中Granzyme B（GZMB）通过诱导肾小管细胞损伤、炎症反应和部分上皮间质转化（p-EMT）促进肾纤维化，而丝氨酸蛋白酶抑制剂NM通过抑制IL-17/c-Fos信号通路减轻肾损伤和纤维化。

　　慢性肾病（CKD）是一种全球性的公共卫生问题，其主要特征是肾功能的逐渐丧失和纤维化，最终可能导致终末期肾病（ESRD）。肾小管损伤和肾间质纤维化是这一过程中的关键因素。Granzyme B（GZMB）作为一种丝氨酸蛋白酶，已被研究用于其在免疫防御中诱导细胞凋亡的作用。然而，关于GZMB在肾小管损伤和肾间质纤维化中的具体作用仍不清楚。Nafamostat mesylate（NM）是一种广谱的丝氨酸蛋白酶抑制剂，临床上常用于血液透析过程中的抗凝治疗。本研究旨在探讨GZMB对肾损伤和肾间质纤维化的影响，并进一步研究NM在肾损伤和肾间质纤维化中的干预机制。

为了阐明NM在肾纤维化中的治疗机制，我们整合了体内单侧缺血再灌注损伤（UIRI）模型与体外实验，使用人近端肾小管上皮细胞（HK-2细胞）在TGF-β或GZMB刺激下进行实验。通过肾功能检测、组织病理学评估、免疫荧光染色、Western blot和qRT-PCR分析，我们评估了NM的治疗效果。此外，我们还进行了RNA测序以识别关键的信号通路。这些方法共同揭示了NM在体内和体外改善肾损伤和纤维化的机制。

研究结果显示，GZMB在多种小鼠肾纤维化模型以及TGF-β刺激的HK-2细胞中均显著上调。体外实验表明，GZMB处理可导致HK-2细胞损伤、炎症反应和部分上皮-间质转化（p-EMT）。转录组分析显示，GZMB与穿孔素的联合处理显著改变了与凋亡、炎症和纤维化相关的基因表达。NM能够有效减轻GZMB诱导的HK-2细胞损伤、炎症反应和p-EMT。此外，NM还能抑制TGF-β诱导的p-EMT。在小鼠UIRI模型中，NM治疗显著改善了肾功能，减少了纤维沉积，并对细胞凋亡和线粒体功能障碍起到了保护作用。RNA测序分析表明，NM的肾保护作用是通过抑制IL-17/c-Fos信号通路实现的。

讨论部分指出，本研究确认了GZMB在促进肾纤维化过程中的作用，通过诱导肾小管细胞损伤和p-EMT。NM能够有效对抗GZMB和TGF-β引起的有害影响，改善肾功能并减轻纤维化，这表明NM在治疗CKD方面具有潜在价值。其肾保护作用与抑制IL-17/c-Fos信号通路密切相关。这些结果表明，NM可以作为治疗CKD的新药。

研究还发现，GZMB在体内肾纤维化模型和TGF-β刺激的HK-2细胞中均显著上调。体外实验显示，GZMB处理导致HK-2细胞损伤、炎症反应和部分上皮-间质转化（p-EMT）。转录组分析显示，GZMB与穿孔素的联合处理显著改变了与凋亡、炎症和纤维化相关的基因表达。NM能够有效减轻GZMB诱导的HK-2细胞损伤、炎症反应和p-EMT。此外，NM还能抑制TGF-β诱导的p-EMT。在小鼠UIRI模型中，NM治疗显著改善了肾功能，减少了纤维沉积，并对细胞凋亡和线粒体功能障碍起到了保护作用。RNA测序分析表明，NM的肾保护作用是通过抑制IL-17/c-Fos信号通路实现的。

研究进一步揭示了NM在肾纤维化中的作用机制。在体内实验中，NM显著改善了肾功能，减少了纤维沉积，并对细胞凋亡和线粒体功能障碍起到了保护作用。体外实验显示，NM能够有效减轻GZMB诱导的HK-2细胞损伤、炎症反应和p-EMT。此外，NM还能抑制TGF-β诱导的p-EMT。RNA测序分析表明，NM的肾保护作用是通过抑制IL-17/c-Fos信号通路实现的。

此外，研究还探讨了NM对肾间质纤维化的影响。在UIRI模型中，NM治疗显著改善了肾功能，减少了纤维沉积，并对细胞凋亡和线粒体功能障碍起到了保护作用。体外实验显示，NM能够有效减轻GZMB诱导的HK-2细胞损伤、炎症反应和p-EMT。此外，NM还能抑制TGF-β诱导的p-EMT。RNA测序分析表明，NM的肾保护作用是通过抑制IL-17/c-Fos信号通路实现的。

研究还发现，GZMB在体内和体外均能促进肾纤维化。在体内实验中，GZMB的表达在肾纤维化模型中显著上调，而在体外实验中，TGF-β刺激的HK-2细胞中也观察到GZMB的表达增加。这些结果表明，GZMB在肾纤维化过程中起着重要作用。同时，NM在体外和体内均显示出显著的抗纤维化作用，特别是在抑制TGF-β信号通路和减轻炎症反应方面。

综上所述，本研究揭示了GZMB在肾损伤和纤维化中的关键作用，并确认了NM作为治疗CKD的潜在药物。这些发现为开发新的治疗策略提供了重要的理论基础和实验依据。