Vitexin通过双重抑制TRPV4和MRGPRX2/MrgprB2通路缓解特应性皮炎瘙痒

《International Immunopharmacology》：Vitexin alleviates atopic dermatitis–associated itch via TRPV4 inhibition in sensory neurons and MRGPRX2/MrgprB2 blockade in mast cells

本研究首次揭示天然黄酮苷Vitexin通过双重靶向机制缓解特应性皮炎（AD）瘙痒：在感觉神经元中抑制TRPV4通道钙内流，在肥大细胞中阻断MRGPRX2/MrgprB2信号通路。该发现为开发新型抗瘙痒药物提供了创新策略和理论依据。

　　

研究亮点

VTX抑制TRPV4介导的钙反应

如引言所述，近期研究表明VTX可能通过靶向TRPV4发挥抗瘙痒作用[3]。为验证该假说，我们通过钙成像技术评估了VTX对TRPV4活性的调控作用（图1A）。简言之，在瞬时表达TRPV4的HEK293T细胞中，使用选择性激动剂GSK1016790A（GSK）刺激，并通过VTX预处理观察钙内流变化。如图1B所示，100 nM GSK处理可强烈诱导钙内流，而10 μM VTX预处理显著抑制该反应。浓度效应曲线显示VTX以剂量依赖方式抑制GSK诱导的TRPV4激活（图1C），IC₅₀值为5.2 μM。为验证该效应在天然神经元中的适用性，我们检测了VTX对小鼠背根神经节（DRG）神经元TRPV4信号的影响。在GSK应答的神经元中，VTX预处理使钙响应峰值降低约60%（图1D-E），且应答神经元比例从45%下降至18%（图1F）。这些结果证实VTX能有效抑制神经元TRPV4功能。

VTX阻断MRGPRX2/MrgprB2信号通路

鉴于MRGPRX2/MrgprB2在AD瘙痒中的关键作用，我们进一步探究VTX对该受体的影响。在表达人源MRGPRX2或鼠源MrgprB2的HEK293T细胞中，VTX剂量依赖性地抑制化合物48/80（C48/80）诱导的钙信号（图2A-B）。值得注意的是，VTX对MRGPRX1或MrgprC11等同源受体无显著影响（图2C），提示其作用具有受体选择性。分子对接模拟显示，VTX可嵌入MRGPRX2/MrgprB2的激动剂结合口袋，与关键氨基酸残基形成氢键网络（图2D），这为其特异性阻断作用提供了结构基础。

VTX抑制肥大细胞脱颗粒

基于VTX对MRGPRX2/MrgprB2信号的抑制，我们评估了其对肥大细胞脱颗粒的影响。在原代小鼠腹膜肥大细胞和人HMC1.2细胞中，VTX预处理显著降低C48/80诱导的β-己糖胺酶释放（图3A-B），且该抑制作用呈浓度依赖性。有趣的是，VTX对IgE介导的肥大细胞脱颗粒无显著影响（图3C），进一步证实其特异性靶向MRGPRX2/MrgprB2通路。

VTX缓解AD模型瘙痒行为

在MC903诱导的小鼠AD模型中，局部涂抹VTX可显著减少 scratching 行为（图4A），并降低皮肤组织中肥大细胞活化标志物水平（图4B）。分子水平检测显示，VTX处理组皮肤中Trpv4和MrgprB2的转录上调受到抑制（图4C-D）。尤为重要的是，在Trpv4基因敲除小鼠中，VTX仍能部分缓解瘙痒（图4E），表明其抗瘙痒作用同时依赖于TRPV4抑制和MRGPRX2/MrgprB2阻断机制。

讨论

本研究首次证实天然黄酮苷VTX通过双重机制发挥抗瘙痒作用：一方面抑制感觉神经元TRPV4通道功能，另一方面阻断肥大细胞MRGPRX2/MrgprB2信号通路。如前所述，近期研究报道VTX在多种动物模型中具有抗瘙痒效果[3]。特别值得注意的是，VTX不仅能缓解急性瘙痒诱导的抓挠行为，对慢性瘙痒模型同样有效。我们的发现为这些体内药效学结果提供了分子层面的机制解释。

结论

本研究提供新颖证据表明VTX是TRPV4和MRGPRX2/MrgprB2的双重抑制剂，这为其用于瘙痒管理提供了机制解释。这些发现支持进一步研究VTX作为包括AD在内的多种瘙痒性疾病的潜在治疗剂。