环介导等温扩增技术在儿童麻风病鼻拭子和皮肤涂片诊断中的价值分析

《Indian Journal of Pediatrics》：Diagnostic Role of Loop-Mediated Isothermal Amplification (LAMP) Assay in Nasal Swabs and Slit Skin Smear Specimens in Pediatric Leprosy

儿童麻风病诊断面临传统涂片法灵敏度低的挑战。本研究评估了LAMP技术在SSS和鼻拭子样本中的诊断性能，结果显示LAMP在SSS和鼻拭子中的阳性率分别达73.6%和69.8%，显著高于显微镜检，尤其对少菌型病例检测优势明显，为儿科提供了非侵入性诊断新方案。

　　

在麻风病仍然流行的地区，儿童麻风病的早期诊断一直是临床面临的重大挑战。由于儿童患者症状不典型，细菌负荷量低，传统的诊断方法——皮肤涂片显微镜检法灵敏度有限，特别是对于少菌型麻风病病例，漏诊率较高，延误治疗可能导致不可逆的神经损伤和残疾。因此，开发一种快速、灵敏且适合在资源有限地区应用的儿童麻风病诊断工具至关重要。

近期发表在《Indian Journal of Pediatrics》上的一项研究，为破解这一难题带来了希望。由Anika Bhandari、Rajeshwar Dayal、Raj Kamal等研究人员组成的团队，探索了一种名为环介导等温扩增（Loop-Mediated Isothermal Amplification, LAMP）的分子生物学技术，在儿童麻风病诊断中的应用潜力。与需要精密仪器的传统PCR（聚合酶链式反应）不同，LAMP技术能在恒定温度下快速扩增DNA，操作简便、成本较低，更适合在基层实验室推广。

本研究旨在评估LAMP法在两种常见临床样本——皮肤涂片和鼻拭子中检测麻风分枝杆菌（Mycobacterium leprae）的性能，并与金标准齐-尼氏（Ziehl-Neelsen）染色显微镜检法进行对比，重点关注其在检测少菌型病例方面的灵敏度。

为开展此项研究，研究人员在印度萨罗吉尼·奈杜医学科学院和印度医学研究理事会-国家JALMA麻风及其他分枝杆菌疾病研究所招募了53名经临床诊断为麻风病的0-14岁儿童患者。研究团队同时采集了每位患者的皮肤涂片和鼻拭子样本。每份样本均平行进行了传统的齐-尼氏染色显微镜检和LAMP检测。LAMP检测靶向麻风分枝杆菌特有的RLEP重复序列，该序列的存在可作为确认感染的分子标志。统计分析以p值小于0.05为具有统计学显著性。

研究对象特征

研究纳入的53名儿童中，10-14岁年龄组占了绝大多数（77.4%），男性患者比例（70%）高于女性。值得注意的是，近七成（69.8%）的患儿有家族接触史，提示家庭内传播是儿童感染的重要途径。临床表现方面，近半数（47%）患儿表现为单一的色素减退性皮肤病变，同时出现皮肤病变和神经增厚的患儿占39.6%。

显微镜检与LAMP检测结果比较

传统显微镜检的结果凸显了其在儿童麻风病诊断中的局限性。在皮肤涂片样本中，仅检出9例（30%）阳性，且全部为多菌型病例；鼻拭子样本中检出8例（26.67%）阳性，同样均为多菌型。令人担忧的是，所有少菌型病例均未被显微镜检法发现。

与之形成鲜明对比的是，LAMP技术表现出极高的灵敏度。在皮肤涂片样本中，LAMP检出39例（73.6%）阳性；在鼻拭子样本中，检出37例（69.8%）阳性，其检出率显著高于显微镜检（p<0.05）。尤其具有突破性意义的是，在35例少菌型病例中，LAMP技术通过皮肤涂片检出了21例（60%），通过鼻拭子检出了19例（54%），这表明LAMP能有效识别出传统方法极易漏诊的少菌型感染。此外，皮肤涂片LAMP与鼻拭子LAMP的检测结果高度一致（p<0.001），说明两种样本用于LAMP检测均能可靠地反映感染状况。

LAMP在鼻拭子样本中的应用优势

尽管皮肤涂片LAMP的灵敏度略高于鼻拭子，但鼻拭子采集具有无创、无痛的特点，避免了皮肤切口给儿童带来的疼痛和恐惧，患者依从性更高，这在儿科实践中是一个至关重要的优势。因此，鼻拭子结合LAMP检测提供了一种更易于被儿童和家长接受的诊断选择。

本研究得出结论，LAMP技术，特别是应用于鼻拭子样本时，能显著提高儿童麻风病的诊断率。其高灵敏度，尤其是对少菌型病例的检测能力，以及鼻拭子采样的无创性，使其成为一种非常具有前景的、适合在基层医疗单位推广的儿童麻风病诊断工具。研究结果与近期其他支持LAMP作为麻风病，特别是少菌型麻风病实用、经济有效诊断工具的研究相一致。研究人员建议未来在更大样本量中进行进一步验证，以巩固其应用价值。这项研究为早期发现和管理儿童麻风病，最终实现阻断传播、预防残疾的目标，迈出了坚实的一步。

主要技术方法概述

本研究为诊断性试验。研究队列为53名临床诊断的儿童麻风病患者。关键技术方法包括：采集皮肤涂片和鼻拭子两种临床样本；对样本进行齐-尼氏染色显微镜检作为参照；同时使用LAMP技术靶向扩增麻风分枝杆菌的RLEP基因序列进行检测；采用统计学方法比较两种检测方法的阳性率及其一致性。