研究影响血红蛋白A1C冷冻混合血液材料可互换性的因素

《JOURNAL OF CLINICAL LABORATORY ANALYSIS》：Investigating the Factors Affecting the Commutability of Hemoglobin A1C Frozen Pooled Blood Materials

HbA1C测量中冷冻混合血液材料的互操作性评估及影响因素研究，采用酶法（EN）作为参考方法，对比了CE、CE-HPLC、TI和BA-HPLC等五种检测技术的性能。结果显示FPB2和FPB4在BA-HPLC中因溶血导致高血浆吸光度（HI≥87%）和低pH（7.00–7.71）而不互操作，而CE和TI在HI≤99%时保持兼容。提出溶血和矩阵效应是影响互操作性的关键因素，需优化FPB制备（如控制HCT≥40%）和储存条件（-70°C以下）以减少干扰。

　　糖尿病是一种全球范围内的主要非传染性疾病，其患病人数正在迅速上升。根据国际糖尿病联盟的预测，到2030年，全球将有6.43亿成年人患有糖尿病，而2023年的数据则为5.37亿。在泰国，2020年的数据显示有330万糖尿病病例，与之相关的死亡人数达到16,388例。这些数据突显了准确测量血糖水平在疾病诊断和治疗中的重要性，因为不良的血糖控制会对多个器官造成严重影响。在临床实践中，血红蛋白A1c（HbA1c）作为反映过去2至3个月平均血糖水平的指标，被广泛用于糖尿病的诊断和管理。根据美国糖尿病协会的建议，HbA1c≥6.5%可作为糖尿病的诊断依据，而5.7%至6.4%则提示处于糖尿病前期状态。治疗的目标是通过将HbA1c控制在7%以下来减少并发症的发生。

HbA1c的检测并不需要空腹，因此在泰国等国家，因其操作简便而被广泛采用。然而，为了确保检测结果的准确性，必须对检测方法进行标准化和质量控制。实验室中，HbA1c的测量方法多种多样，包括酶法（EN）、毛细管电泳（CE）、离子交换高效液相色谱（CE-HPLC）、浊度免疫法（TI）以及硼酸亲和高效液相色谱（BA-HPLC）。其中，酶法在可追溯到国际临床化学与实验室医学联合会（IFCC）的次级参考测量程序（SRMP）时，被视为HbA1c检测的黄金标准。然而，其他方法可能受到样本中干扰物质的影响，导致检测结果的偏差。因此，研究HbA1c测量方法之间的可比性，以及评估加工血液材料（PBM）在这些方法中的表现，成为确保检测一致性的重要环节。

加工血液材料（PBM）在实验室质量控制和外部质量评估（EQA）中发挥着关键作用，尤其在无法使用新鲜全血（FWB）的情况下。然而，这些材料的可比性可能会受到多种因素的影响，例如血红细胞裂解（即溶血）和基质修饰。在泰国，常见的加工血液材料包括冷冻混合血液（FPB）、单一供体血液（SDB）以及体外糖化血液（IGB）。尽管冷冻技术可以实现长期保存，但其可能导致血红细胞破裂，从而影响检测结果的准确性。因此，本研究旨在评估FPB的可比性，并探讨影响其在HbA1c测量中表现的因素，以优化加工血液材料的制备方法，提高HbA1c检测的可靠性和一致性。

研究中，使用了24个临床血液样本（CBSs）和10种PBM进行HbA1c含量分析。这些样本通过酶法（EN）作为参考测量程序（RMP），并与其他四种检测方法进行对比。通过Deming回归和95%预测区间（PI）对可比性进行了评估。研究结果显示，FPB1和SDB在所有检测方法中均表现出良好的可比性，而FPB2和FPB4则在BA-HPLC方法中出现非可比性，因为这些数据点落在Deming回归线的容限范围之外。这表明，某些加工血液材料在特定检测方法中的表现可能与临床样本存在差异。此外，非可比性样本通常表现出较高的血浆吸光度（PA）和溶血指数（HI），以及较低的pH值，这可能影响检测结果的稳定性。同时，血液样本中的碎屑细胞（DC）也可能对某些检测方法，如CE-HPLC，产生干扰。

研究还发现，虽然HCT（红细胞压积）和DC在一定程度上可能影响检测方法的性能，但它们对HbA1c测量的可比性影响较小。然而，维持适当的HCT水平和监控DC可能对确保FPB在HbA1c比较中的可靠性至关重要。这一发现对于实验室在使用加工血液材料进行质量评估时具有重要意义，因为不同检测方法可能对同一材料的反应存在差异。例如，在BA-HPLC方法中，溶血导致的PA和HI升高可能干扰光学检测，影响HbA1c与HbA0的区分。此外，低pH值可能降低BA-HPLC中cis-二醇与硼酸基团的结合效率，从而导致HbA1c含量的低估。

为了进一步提高加工血液材料的可比性，研究建议在制备过程中优化存储条件，例如将FPB储存于?70°C至?80°C之间，以减少溶血和样本降解。此外，SDB和IGB的HCT应保持在36%至54%之间，与新鲜全血的HCT相近。对于BA-HPLC方法，建议使用0.1M氢氧化钠溶液来维持pH值在7.83至8.00之间，以确保检测的准确性。这些措施有助于减少基质效应，提高不同检测方法之间的可比性，从而确保实验室检测结果的一致性。

本研究的结果为临床实验室在使用加工血液材料进行质量控制和外部质量评估提供了重要的参考。尽管样本量有限可能影响结论的普遍适用性，但研究结果仍揭示了溶血对HbA1c测量方法可比性的重要影响。未来的研究需要进一步扩大样本规模，并对不同PA、HI和pH值的血液材料进行更全面的比较，以确保检测方法的稳定性和准确性。此外，实验室应加强对未知峰的检测和分析，这些峰可能源于样本长期储存过程中产生的碎屑细胞，从而影响检测结果的可靠性。通过这些改进措施，可以更好地满足不同检测方法对血液材料的要求，提升HbA1c检测的整体质量。