CD46基因编辑MDBK细胞构建及其对BVDV感染抵抗机制的研究

《Microbes and Infection》：CD46 edited MDBK cells exhibit resistance to BVDV infection

本研究利用CRISPR/Cas9基因编辑技术成功构建CD46受体缺失的MDBK细胞系，证实其可显著抵抗牛病毒性腹泻病毒（BVDV）感染。研究通过对比敏感细胞（MDBK）与天然耐药细胞（CRIB）的CD46受体特征，揭示了病毒附着平台（E66QIV69/G82QVLAL87）的关键作用，为开发抗病毒育种模型提供了新策略。

　　

亮点

CD46受体剪接变体的鉴定与CCP1特征分析

通过PCR产物分析并结合克隆测序验证，研究团队鉴定出四种CD46剪接变体。在CRIB细胞中发现AEB53068.1剪接变体；MDBK细胞测序获得两种转录本（NP_001229491和XP_005217376），后者在 exon 1 存在V79I非 synonymous 替换；而胎儿成纤维细胞转录本则对应AIC33505变体。外显子1测序结果显示，所有被测细胞系均携带野生型CD46序列，其病毒结合平台（E₆₆QIV₆₉和G₈₂QVLAL₈₇）未发生突变。这一发现表明CRIB细胞的BVDV抗性并非由CD46受体突变介导。

讨论

自CD46被鉴定为BVDV通过结合平台（E₆₆QIV₆₉和G₈₂QVLAL₈₇）入侵的细胞受体以来，CRISPR/Cas9等基因编辑技术已被用于通过删除或编辑CD46受体基因开发BVDV抗性细胞系。该策略结合克隆技术，于2023年成功培育出首例基因编辑BVDV抗性牛犊。此前，CRIB细胞系已被作为抗性研究的体外模型建立。本研究通过对比CRIB与MDBK细胞的CD46特征，证实CRIB细胞表达野生型CD46蛋白，其抗性更可能源于截短型ADAM17分子引起的膜组成与内吞途径改变。通过靶向删除CD46 exon 1编码的病毒结合平台，成功获得两株纯合缺失（A、B系）和一株杂合编辑（C系）MDBK细胞。编辑后的A、B系对BVDV表现出超过90%的抗性，为探索替代病毒受体和入侵通路提供了新模型。

结论

（注：原文未提供具体结论内容，此处根据摘要和讨论部分归纳）

基因编辑CD46可有效赋予MDBK细胞BVDV抗性，证实了该受体在病毒感染中的核心地位。CRIB细胞的抗性机制可能与ADAM17相关的膜特性改变有关。本研究为抗病毒育种提供了理论依据和技术路径。