温控一锅式CRISPR/Cas12b-ERA系统在发热伴血小板减少综合征病毒（SFTSV）检测中的创新应用

《Sensors and Actuators B: Chemical》：A temperature-controlled one-pot CRISPR/Cas12b combined with ERA detection system in SFTSV detection

本研究开发了一种温控一锅式检测（TCOD）新方法，通过精确温度控制实现酶促重组酶扩增（ERA）与CRISPR/Cas12b检测的时空分离。该方法在45分钟内可实现单拷贝检测灵敏度，临床样本验证与qPCR结果高度一致，为发热伴血小板减少综合征病毒（SFTSV）的现场快速检测提供了创新解决方案。

　　

亮点

临床样本采集

本研究所用临床血清样本及逆转录获得的cDNA由中国疾病预防控制中心惠赠。所有样本的采集和处理均严格遵循世界卫生组织（WHO）推荐的SFTSV标准操作规程。

核酸制备

为构建标准质粒进行方法验证，首先将SFTSV HB29株的S片段克隆至pHH21载体。

TCOD检测方法设计

我们的实验开发了一种新颖的、温控的一锅法方法，该方法依赖于AapCas12b的切割活性（图1）。该方法结合了ERA扩增和CRISPR/AapCas12b试剂。整个单管反应包括ERA扩增、CRISPR/Cas12b切割的特异性激活和荧光报告。在37°C阶段，AapCas12b的切割活性极低，主要进行ERA扩增，产生大量靶基因。

结论

总而言之，我们的研究成功开发了TCOD检测法——一种具有高特异性和超灵敏检测能力的诊断方法。我们的方法既不依赖复杂或昂贵的设备，也无需对sgRNA或Cas12b蛋白进行复杂的修饰。此外，通过将ERA扩增整合到一锅法工作流程中，同时保持优异的检测限，我们的方法显著缩短了获得阳性结果所需的时间。在这一方法中，我们...