综述：适用于PEG化分子中总PEG定量检测的半均相竞争性ELISA方法的开发

《Bioanalysis》：Development of a fit-for-purpose semi-homogeneous competitive ELISA for total PEG quantitation in a PEGylated molecule

本文成功开发并验证了一种灵敏的、适用于特定目的的半均相竞争性ELISA（酶联免疫吸附测定）方法，用于定量食蟹猴血清中总PEG（聚乙二醇）浓度，以支持GLP（良好实验室规范）毒理学研究。该方法以PEG化抗因子D Fab片段（PEG-aFD）为研究对象，使用生物素化版本的治疗分子作为竞争物，LLOQ（定量下限）达200 ng/mL，为评估PEG化药物的药代动力学提供了关键工具。

　　

Aim

药物的治疗效果可以通过延长其在体内的滞留时间而得到显著增强。聚乙二醇化（PEGylation）技术正是一种用于延长蛋白质治疗剂半衰期的有效方法。研究者开发了PEG化抗因子D（anti-Factor D）Fab片段（PEG-aFD），作为一种潜在的治疗药物，其通过靶向因子D（Factor D），旨在减少地理萎缩（geographic atrophy）患者玻璃体内注射的频率。为了支持一项GLP（Good Laboratory Practice，良好实验室规范）毒理学研究，迫切需要开发一种能够测量总PEG浓度的检测方法。

Result

PEG-aFD由与多臂PEG分子缀合的Fab片段组成，这种独特的结构给PEG检测方法的开发带来了挑战。研究者成功开发并验证了一种灵敏的、适用于特定目的的半均相竞争性ELISA（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay）。该方法的独特之处在于使用了生物素化版本的治疗分子本身作为竞争分子。方法的定量下限（LLOQ， lower limit of quantification）达到200 ng/mL，显示出极高的灵敏度。利用该 assay，研究人员对毒理学研究中食蟹猴（cynomolgus monkey）的血清样本进行了总PEG浓度测量。结果显示，在所有剂量水平的所有样本中均检测到了可量化的PEG水平，其浓度范围从0.468 μg/mL到188 μg/mL。然而，在所有动物中均未观察到与PEG相关的毒性反应。

Conclusion

综上所述，本研究成功开发并验证了一种竞争性ELISA方法，用于准确测量食蟹猴血清样本中的总PEG浓度。该方法的建立为相关的GLP毒理学研究提供了至关重要的数据支持，确保了PEG化药物在临床前研究阶段的安全性评估。