应用免疫组化与显微CT技术重新审视家鸡口旁器官的存在与否

《Annals of Anatomy - Anatomischer Anzeiger》：Re-examination of the juxta-oral organ in domestic chicken ( Gallus gallus domesticus) using immunohistochemistry and micro-computer tomography techniques

本文通过免疫组化(CK6A/TUJ1/SMA染色)与显微CT技术，系统研究鸡胚胎(E8-E20)口腔侧壁结构发育。研究发现颊褶处腺体结构实为口角腺(GAO)，与神经元(IIIβ-微管蛋白)密切关联，最终证实家鸡不存在口旁器官(JOO)，为脊椎动物器官同源性研究提供新证据。

　　

章节亮点

动物

受精鸡蛋（家鸡）在受精后第0天从井上养鸡场（日本神奈川县相模原市）采购。鸡蛋在38°C下孵化，每三天翻动一次直至胚胎发育第18天。孵化器底部放置水盆确保65-70%湿度。第18-21天停止翻动。至少采集3个胚胎样本，包括胚胎日(E)8、E8.5、E9、E10、E11、E12、E13以及两个E20胚胎。

E8-E10上颌-下颌关节处上皮芽形成

对E8起鸡胚头部冠状连续切片进行分析，特别关注从喙尖向后延伸的喙腔。直到上颌-下颌关节部位(MMJS)（图1A和B框选区域），除口腔上皮外未观察到其他上皮结构。但在靠近MMJS的喙腔转角处，发现双侧上皮增厚区域。

讨论

本研究采用免疫组化(IHC)和显微CT等高分辨率方法重新检测家鸡口旁器官(JOO)的存在。从E8鸡胚胎连续切片中观察到颊褶增厚，但发现芽状突起与上颌、下颌突的上皮汇合处拓扑关系更密切。预期中的JOO应与颊上皮关系更近。这种细胞角蛋白6A(CK6A)阳性的芽状结构随后形成腺泡样单位，并表达α-平滑肌肌动蛋白(SMA)——这是唾液腺肌上皮细胞的典型特征。显微CT三维重建证实该结构与下颌神经分支的毗邻关系。结合其组织学特征、神经元关联（IIIβ-微管蛋白/TUJ1阳性神经纤维）及发育模式，我们认定该结构为口角腺(GAO)。由于该区域未发现其他上皮结构，推论家鸡不存在JOO。本研究首次通过现代技术验证鸟类JOO问题，为脊椎动物器官进化研究提供新视角。

结论

本研究在家鸡胚胎颊褶处发现腺体结构，鉴定为口角腺(GAO)。因该区域无其他上皮结构，得出结论：鸡胚胎不存在口旁器官(JOO)。需进一步研究该腺体发育涉及的分子通路。

资助

本研究获国防医学院基金支持。

作者贡献声明

Yuto Fujimitsu：审阅编辑·调查·数据整理。Masataka Ito：审阅编辑·验证·监督·资源·项目管理·方法论·概念化。Anna Kanewska：初稿撰写·可视化·研究·形式分析·数据整理。Wataru Yano：审阅编辑·可视化·软件·方法论·形式分析·数据整理。

利益冲突

作者声明无利益冲突。

致谢

感谢阪由女子小姐提供技术支持，中谷特蕾莎女士进行语言编辑和稿件校对。