STABILON元件通过抑制CHO细胞蛋白酶体降解途径显著增强重组蛋白表达稳定性

本文首次发现STABILON元件可通过调控泛素-蛋白酶体降解途径，显著提升CHO细胞中重组治疗性蛋白（RTPs）的瞬时/稳定表达水平。该研究揭示了STABILON在长期传代培养中减少蛋白降解的新机制，为工业级RTPs生产提供了创新策略。

　　

¹亮点

• STABILON元件可同时增强重组蛋白的瞬时与稳定表达

• 首次揭示STABILON通过泛素-蛋白酶体途径抑制蛋白降解

• 显著提升EGFP/SEAP/IL-6在长期传代中的蛋白保留率

• 为工业化生产重组治疗性蛋白提供创新解决方案

²瞬时表达分析

选择EGFP作为报告基因来评估STABILONs对CHO细胞瞬时表达水平的影响。荧光显微镜观察显示，五种STABILONs均能增强CHO细胞中EGFP的荧光强度（图2A），且STABILONs对细胞生长特性无显著影响（图2B）。与对照组相比，所有STABILONs均能提高EGFP的平均荧光强度（MFI），其中Stab-Dm、Stab-Hs和Stab-Hs2分别提高1.34倍、1.43倍和1.4倍（图2C）。Western blot分析进一步证实了该趋势。

³讨论

过去二十年间，通过多种策略显著提高了CHO细胞中的重组蛋白产量。然而，随着细胞培养时间的延长，重组蛋白产量下降仍是亟待解决的关键问题。本研究首次证实STABILON基序（Stab）在CHO细胞长期传代过程中具有维持重组蛋白稳定性的双重调控作用。

⁴作者贡献声明

王晓音：文稿审阅与资源提供。王天云：文稿审阅、课题指导与资金支持。王艳芳：文稿审阅与学术监督。郭晓：实验验证与数据分析。孙秋丽：可视化呈现与实验研究。韩子萌：实验验证与数据分析。李佳欣：初稿撰写、方法设计与概念构思。赵亚茹：初稿撰写、方法设计与概念构思。

⁵利益冲突声明

作者声明不存在可能影响本研究成果的财务利益或个人关系冲突。

⁶致谢

本研究获得国家自然科学基金（U23A20270）、河南省科技研发联合基金（235101610005、245101610004）、河南省青年人才培育项目（2024HYTP009）及河南省自然科学基金（232300421115、252300421678）支持。

⁷结论

我们首次发现STABILONs能通过减少CHO细胞长期传代过程中的蛋白水解降解，显著增强瞬时/稳定表达及重组蛋白产量，该技术有望应用于重组治疗性蛋白的工业化生产。