功能性NK细胞在单倍体相合造血干细胞移植后的恢复延迟：许可滞后与抗急性髓系白血病活性低下

《Blood Advances》：Functional recovery of NK cells after T-cell replete haploidentical HSCT: delayed licensing and poor anti-AML activity

为解决单倍体相合造血干细胞移植(h-HSCT)后NK细胞功能重建不足的问题，研究人员开展了一项针对56例接受PTCy和ATG预防方案患者的纵向研究。结果显示，尽管NK细胞数量早期恢复，但其表现幼稚表型且对AML靶细胞的脱颗粒功能显著受损，功能性教育延迟至移植后60天才开始重建。该发现为高危髓系恶性肿瘤的免疫治疗策略提供了关键理论依据。

　　

对于缺乏人类白细胞抗原（HLA）全相合供者的血液系统恶性肿瘤患者而言，单倍体相合造血干细胞移植（haploidentical hematopoietic stem cell transplantation, h-HSCT）已成为重要的治疗选择。然而，移植后免疫系统的重建质量直接影响临床预后，其中自然杀伤（natural killer, NK）细胞作为先天免疫的核心力量，其功能恢复尤为关键。当前临床广泛采用移植后环磷酰胺（post-transplant cyclophosphamide, PTCy）联合抗胸腺细胞球蛋白（anti-thymocyte globulin, ATG）的方案预防移植物抗宿主病（graft-versus-host disease, GVHD），但该强效免疫抑制方案对NK细胞亚群重建的功能影响仍存在认知空白。特别是在急性髓系白血病（acute myeloid leukemia, AML）的治疗中，NK细胞介导的移植物抗白血病（graft-versus-leukemia, GVL）效应至关重要，其功能缺陷可能导致疾病复发风险增加。

为系统评估h-HSCT后NK细胞的功能演化轨迹，由Maxime Jullien、Enora Ferron及Christelle Retière等研究人员领衔的团队在《Blood Advances》发表了前瞻性队列研究成果。该研究纳入56例接受非去T细胞单倍体移植并采用PTCy+ATG预防方案的成年患者，以200例健康志愿者作为对照，在移植后第+30、+60及+100天动态采集外周血样本。通过多参数流式细胞术结合无监督聚类分析，系统解析NK细胞免疫表型特征；采用脱颗粒（degranulation）实验定量评估NK细胞对淋巴系和髓系靶细胞的细胞毒性功能；同时结合供受者HLA基因分型与巨细胞病毒（cytomegalovirus, CMV）再激活临床数据，深入探讨功能性教育（functional education）机制的重建规律。

关键技术方法

研究团队建立了一套多维评估体系：1）采用流式细胞术对NK细胞进行免疫表型分析，通过CD56、CD16等表面标志物定义不同亚群；2）利用无监督聚类算法（如t-SNE、PhenoGraph）实现亚群的精细划分；3）通过CD107a脱颗粒实验检测NK细胞对K562（淋巴瘤细胞系）和AML细胞系（如OCI-AML3）的杀伤活性；4）收集供受者HLA-C基因型数据，分析杀伤细胞免疫球蛋白样受体（killer-cell immunoglobulin-like receptor, KIR）配体匹配状态对NK细胞"许可"（licensing）过程的影响。

NK细胞表型重建特征

移植后早期（day+30）NK细胞虽数量快速恢复，但呈现显著不成熟表型：CD56^bright亚群比例升高，而CD56^dim亚群比例降低，且激活标志物（如NKG2D、DNAM-1）表达水平显著低于健康对照。这种表型幼稚状态持续至day+100，提示免疫抑制方案可能延缓了NK细胞的终末分化。

抗肿瘤功能选择性受损

研究发现NK细胞对K562淋巴瘤靶细胞的脱颗粒功能在移植后各时间点均保持完整，但对AML细胞系的杀伤活性却显著降低。尤为重要的是，即便在表型成熟的CD56^dimNK细胞中，抗AML活性缺陷依然存在，表明功能损伤并非单纯由细胞成熟度不足所致，而是涉及更复杂的调控机制。

CMV再激活的差异化影响

CMV再激活可驱动记忆样NK细胞（CD56^dimNKG2C⁺）亚群的扩增，但该扩增并未转化为对AML靶细胞的增强杀伤。这说明CMV诱导的NK细胞记忆表型扩张，可能缺乏针对髓系恶性肿瘤的特异性识别能力。

KIR介导的功能性教育延迟重建

通过分析KIR与其HLA配体的相互作用，研究发现NK细胞的功能性教育在day+30时完全缺失，直至day+60才开始逐步重建。教育过程的重建速度与受体HLA-C基因型显著相关，提示供者来源的NK细胞需要在新宿主体内经历漫长的"再许可"过程，才能恢复对自身HLA I类分子缺失靶细胞的识别能力。

结论与展望

本研究首次系统揭示了PTCy+ATG预防方案背景下，h-HSCT后NK细胞功能重建的三大核心特征：数量恢复与功能解耦、抗髓系活性特异性缺损、以及KIR教育机制延迟重启。这些发现合理解释了该类移植模式下AML患者复发风险较高的临床现象，为开发靶向NK细胞功能重塑的干预策略提供了理论依据。作者建议，针对高危髓系恶性肿瘤患者，应考虑联合过继输注体外扩增的成熟NK细胞、或采用KIR配体不匹配供者等策略，以突破现有免疫重建瓶颈。该研究不仅深化了对移植后免疫微环境的理解，更为精准免疫治疗提供了新的时间窗与作用靶点。