基于qPCR检测儿童腹泻与无症状感染中EAEC细菌载量的比较研究及其临床意义

《Enfermedades Infecciosas y Microbiología Clínica》：Comparación de la carga bacteriana de Escherichia coli enteroagregativa (EAEC) mediante un PCR en tiempo real (qPCR) en ni?os con diarrea e infección asintomática

本研究通过实时荧光定量PCR（qPCR）技术，比较了腹泻患儿与无症状感染儿童粪便中肠集聚性大肠杆菌（EAEC）的细菌载量差异。结果显示腹泻患儿EAEC载量（2,781 细菌/mg）显著高于无症状儿童（138 细菌/mg），且该方法检测灵敏度高（10个aggR基因拷贝/5个细菌），为EAEC致病机制研究和儿童腹泻区域流行病学监测提供了重要技术支撑。

　　

章节亮点

引言

尽管在改善卫生条件方面付出了诸多努力，腹泻仍然是5岁以下儿童发病和死亡的主要原因之一，尤其在低收入和中等收入国家（LMIC）^1,2，并且其发病率可能因气候变化而增加³。在引起这种感染的细菌病原体中，有多种致泻性大肠杆菌（DEC）病原型，其中肠集聚性大肠杆菌（EAEC）是从...

研究人群与样本量

本研究使用了先前一项研究的样本，该研究招募了555名12-18个月大的儿童，在秘鲁利马北部的一个区进行了为期6个月的随访，这是一项用于评估牛乳铁蛋白预防腹泻效果的随机、双盲、安慰剂对照试验¹⁶。该研究共分离出370株EAEC，其中252株来自无症状患者（在粪便样本采集前后一周内无腹泻），128株来自...

校准曲线的标准化

质粒DNA的定量结果在10⁸-10¹⁰ 基因组拷贝/μl范围内，该DNA使用限制性内切酶NotI进行处理，其酶切位点位于104,488 bp位置。制备的稀释液显示可从10⁶ 拷贝/反应扩增至10¹ 拷贝/反应（图1）。反应效率参数的平均值为：扩增效率为99.31%（最小值-最大值：93.06%-109.68%），斜率为-3.345（最小值-最大值：-3.50至-3.11），且...

讨论

不同的分子方法已被应用作为微生物的诊断鉴定测试，使用该微生物的特征性参考基因/毒力基因。本研究使用质粒基因aggR来鉴定“典型”EAEC^7,9。该基因为单拷贝，并已在原型EAEC 042菌株中完成测序²¹。此前在秘鲁进行的研究显示了该病原型的流行和分布情况，发现它是...

结论

粪便样本中的EAEC载量在腹泻儿童中高于无症状感染儿童。这种qPCR方法可能有助于研究在流行区儿童中，两组分离率相似情况下的定植作用。