多柔比星通过抑制聚集体形成增强卡非佐米协同抗骨髓瘤效应的机制研究

《European Journal of Pharmacology》：Doxorubicin-mediated retardation of aggresome formation enhances Carfilzomib-induced cell death synergistically by augmenting ER stress and proapoptotic signaling

本研究揭示了多柔比星（Doxorubicin）通过抑制聚集体（aggresome）形成关键组分（如HDAC6、p62、BAG3等），增强卡非佐米（Carfilzomib）诱导的内质网应激（ER stress）与高尔基体应激，进而协同促进多发性骨髓瘤（MM）细胞凋亡的分子机制，为克服蛋白酶体抑制剂耐药提供了新策略。

　　

章节亮点

细胞系、化学品、试剂和抗体

细胞系U266B1、NCI-H929、LP-1和RPMI-8226购自美国模式培养物集存库。RPMI 1640培养基、青霉素和胎牛血清购自GIBCO-BRL公司。台盼蓝（Trypan blue）购自Gibco公司。卡非佐米（Carfilzomib）、多柔比星（Doxorubicin）、来那度胺（Lenalidomide）、泊马度胺（Pomalidomide）、地塞米松（Dexamethasone）、阿利塞特（Alisertib）、吉西他滨（Gemcitabine）、b-Ap15、奥波佐米（Oprozomib）、3-MA、Vps34-PIK III、巴佛洛霉素A1（Bafilomycin A1）、氯喹（Chloroquine）、MHY1485和XRK3F2均购自MedChemExpress公司。

多柔比星协同增强卡非佐米诱导的U266B1细胞死亡

我们评估了来那度胺、泊马度胺、地塞米松、多柔比星、吉西他滨、阿利塞特以及一种抗骨髓瘤化合物EPZ01566增强卡非佐米诱导细胞死亡的潜力。将浓度为10纳摩尔（nM）的卡非佐米，与其他能产生10-20%细胞杀伤效果的测试化合物，单独或共同作用于多发性骨髓瘤细胞系U266B1，24小时后通过台盼蓝拒染法评估细胞活力。结果表明，只有多柔比星与卡非佐米联合使用时，显示出显著的协同细胞杀伤作用。

讨论

本研究证明，在多发性骨髓瘤细胞系U266B1中，多柔比星能协同增强蛋白酶体抑制剂卡非佐米诱导的细胞死亡，并破坏其引发的聚集体形成。机制分析表明，多柔比星下调了聚集体形成的结构组分和促进因子，包括波形蛋白（Vimentin）、c-Myc-HDAC6轴、p62、BAG3、UPF1、HOOK2和动力蛋白（Dynein）。此外，多柔比星通过增强内质网（ER）和高尔基体（Golgi）应激反应以及促进细胞凋亡，来增强卡非佐米诱导的骨髓瘤细胞死亡。值得注意的是，在缺乏聚集体诱导活性的情况下，多柔比星并不能增强蛋白酶体抑制剂介导的骨髓瘤细胞死亡。卡非佐米和多柔比星的联合治疗在三种缺乏聚集体形成能力的骨髓瘤细胞系（LP-1、RPMI-8266和NCI-H929）中未能诱导协同细胞死亡，这些细胞系对卡非佐米比U266B1细胞更敏感。总之，我们的研究结果表明，多柔比星通过抑制聚集体形成来增强卡非佐米诱导的细胞死亡，并且卡非佐米与多柔比星的联合治疗可能是靶向具有聚集体形成活性的骨髓瘤细胞的有效策略。