利用脂聚物纳米复合物介导的CRISPR/Cas9系统实现VEGF-A基因敲低，以抑制银屑病中的血管生成

《ACS Applied Bio Materials》：Lipopolymeric Nanoplex-Mediated CRISPR/Cas9 Delivery for VEGF-A Knockdown in Psoriatic Angiogenesis

CRISPR/Cas9介导的纳米递送系统通过靶向VEGF-A基因治疗银屑病，在体外细胞和体内小鼠模型中均显示显著疗效，纳米复合物具有高效转染、稳定透皮和抑制角质细胞增殖作用。

　　

银屑病是一种慢性、无法治愈的炎症性皮肤病，其特征是免疫细胞浸润、角质形成细胞分化异常以及血管生成增强。血管内皮生长因子-A（VEGF-A）基因的过度表达会促进血管生成，并对内皮细胞的迁移、黏附和增殖至关重要。因此，下调VEGF-A表达是一种治疗与血管生成相关疾病的有前景的策略。我们研究了利用CRISPR/Cas9系统（包括CRISPR相关蛋白9（Cas9）和短回文重复序列（sgRNA）组成的核糖核蛋白复合物）靶向VEGF-A在银屑病中的治疗效果。为了实现体外和体内的高效递送，我们开发了含有sgRNA/eGFP-Cas9 RNPs的脂质聚合物纳米复合物（NPXs）。这些NPXs的粒径为142.2纳米（多分散性指数：0.144），Zeta电位为+4.27 mV，在HaCaT（人永生化角质形成细胞）中的转染效率超过70%。体外皮肤渗透实验显示，24小时后其渗透率为66%。优化后的NPX配方被纳入基于卡波波尔的凝胶中，该凝胶表现出非牛顿流体特性（剪切变稀效应）和可变的触变行为，24小时后的皮肤渗透率为48%。在瑞士白化小鼠的咪喹莫特诱导银屑病模型中进行的体内疗效评估表明，与裸露的RNA分子和空白凝胶对照组相比，NPXs显著降低了银屑病面积和严重程度指数（PASI）评分，减少了表皮损伤，并抑制了角质形成细胞的增殖。基因编辑分析结果显示，通过T7内切酶I检测得到的基因切除率为40.7%，通过Sanger测序得到的切除率为14%。NPXs具备优异的细胞摄取能力、高效的皮肤渗透性和滞留性，以及显著的治疗效果，这共同凸显了NPX介导的CRISPR/Cas9递送技术在银屑病治疗中的潜力。