基于LC/MS/MS的指甲皮质醇/皮质酮与睾酮/雄烯二酮浓度比测定方法及其与血清比值差异研究

《Steroids》：Cortisol-to-cortisone and testosterone-to-androstenedione concentration ratios in nails: Their determination methods based on LC/MS/MS and differences from the serum concentration ratios in the literature

本文开发了LC/ESI-MS/MS方法测定指甲中皮质醇（F）/皮质酮（E）和睾酮（T）/雄烯二酮（AD）浓度比，发现指甲F/E（两性）与T/AD（男性）比值显著低于文献血清值。研究首次揭示白蛋白高结合率（Ka 103–104 M?1）的类固醇（如E、AD）更易富集于指甲，为无创检测中长期类固醇异常提供新依据。

　　

亮点

化学试剂与材料

皮质醇（F）、皮质酮（E）、睾酮（T）和雄烯二酮（AD）均购自东京化学工业株式会社（东京，日本）。氘代内标²H₄-F、²H₈-E和²H₃-T来自西格玛奥德里奇日本公司。精确称取约1毫克各类固醇（包括氘代形式）溶于乙醇配制储备液，于-20°C保存。工作液通过乙醇梯度稀释储备液获得。醛固酮（ALD）等其他试剂均采用色谱纯级别。

指甲类固醇定量方法

本研究分别定量拇指指甲中的皮质类激素（F和E）与雄激素（T和AD），因为未能找到可同时定量这四种类固醇且不受指甲基质干扰的液相色谱条件。为此，我们开发并验证了两套独立的LC/ESI-MS/MS方法，分别用于皮质类激素和雄激素的检测。基于后续3.1.2基质效应、3.1.3校准曲线与线性度等验证结果，最终确立了高灵敏度、高特异性的检测方案。

结论

本研究通过性别分层确定了指甲F/E和T/AD比值，旨在探索循环皮质类激素与雄激素向指甲迁移的影响因素。我们成功建立并验证了两种LC/ESI-MS/MS方法，用于同步测定拇指指甲中的F/E和T/AD。结合文献中各类固醇的血清蛋白结合特性（结合蛋白类型、结合率、游离分数水平及Ka值），首次提出白蛋白结合分数（尽管皮质类激素和雄激素对白蛋白亲和力较低，Ka为10³–10⁴ M^?1）与游离分数共同构成指甲类固醇的来源。这一发现为无创指甲检测中长期类固醇生产异常评估提供了重要理论支撑。