利伐沙班对主动脉狭窄患者炎症和瓣膜钙化的时程依赖性影响：临床与体外研究视角

《Journal of Cellular and Molecular Medicine》：Duration-Dependent Effects of Rivaroxaban on Inflammation and Valve Calcification in Aortic Stenosis: Clinical and In Vitro Insights

长期直接口服抗凝剂（DOACs）治疗可显著降低主动脉瓣狭窄（AS）患者的炎症标志物IL-6和基质金属蛋白酶-9（MMP-9）水平，并减少瓣膜中骨形态发生蛋白4（BMP-4）和骨钙素表达。体外实验显示，利伐沙班通过抑制NF-κB和BMP-4信号通路，在时间依赖性 manner降低间质细胞的炎症和钙化相关标志物。研究证实DOACs可能通过多效机制延缓AS进展。

　　这项研究探讨了直接口服抗凝药（DOACs）对严重主动脉瓣狭窄（AS）患者以及在体外对主动脉瓣间质细胞（VICs）中炎症和钙化的影响。研究团队通过对52名接受手术的AS患者进行分析，发现长期使用DOACs的患者在主动脉瓣钙化标志物如骨钙素（osteocalcin）的表达方面显著降低，且钙化和炎症标志物的表达与DOAC治疗时间呈负相关。此外，在体外实验中，使用利伐沙班（rivaroxaban）处理VICs后，NF-κB和BMP-4的表达均有所减少，且这种效果随着时间延长而更加明显，但与剂量无关。这些发现表明，DOACs可能通过其抗炎和抗钙化作用，对AS的进展产生积极影响。

### 主动脉瓣狭窄的病理机制

主动脉瓣狭窄是一种进行性疾病，其特征是瓣膜钙化和瓣口面积缩小，进而导致血流动力学改变和心血管疾病的发生率与死亡率上升。该病的进展受到多种因素的影响，包括脂质沉积、炎症反应和凝血因子的相互作用。主动脉瓣间质细胞（VICs）在这一过程中起着关键作用，它们在受到促骨形成因子如转化生长因子-β（TGF-β）和骨形态发生蛋白（BMPs）刺激后，会转变为具有骨样特性的细胞，表达如骨钙素、骨桥蛋白等与钙化相关的蛋白。这些变化不仅导致细胞表型改变，还可能引发纤维化和组织重塑，进一步加剧瓣膜功能障碍。

NF-κB作为一种重要的炎症调控因子，其激活会促进多种炎症因子的释放，如白细胞介素-6（IL-6），而IL-6又通过刺激BMP-2促进主动脉瓣钙化。此外，NF-κB的激活还与组织因子（TF）的表达有关，而TF在凝血过程中起着关键作用。因此，NF-κB的抑制可能在一定程度上减少炎症反应和钙化过程，从而延缓疾病的发展。

### DOACs的作用机制与临床意义

DOACs是一类新型抗凝药物，包括利伐沙班、阿哌沙班和达比加群等，它们在多种心血管疾病的治疗中被广泛应用。尤其是在伴有房颤的AS患者中，DOACs被推荐用于预防卒中。然而，DOACs对AS本身及其钙化过程的具体影响尚未被充分研究。本研究首次揭示了利伐沙班在体外对VICs中NF-κB和BMP-4表达的抑制作用，这种抑制效果随着时间延长而增强，但与剂量无关。这意味着，长期使用DOACs可能通过调控细胞内信号通路，减少炎症和钙化过程，从而对瓣膜结构产生保护性作用。

在临床观察中，研究人员发现接受DOAC治疗的AS患者其瓣膜钙化标志物表达水平显著降低，且钙化程度与治疗时间呈负相关。此外，DOAC治疗还与较低的血清MMP-9和IL-6水平相关，这进一步支持了DOACs在抗炎和抗钙化方面的潜力。值得注意的是，尽管某些炎症标志物如CRP和hsIL-6在系统血液中的浓度没有显著差异，但DOAC治疗似乎对局部炎症反应有更直接的影响，这可能与瓣膜微环境的特殊性有关。

### 研究方法与实验设计

研究团队从接受手术的AS患者中获取了主动脉瓣叶，并将其分为三部分用于不同的实验分析。一部分用于组织学和免疫荧光染色，另一部分用于体外VICs的培养和研究，第三部分则用于未来的实验。所有样本均在?80°C下保存，以确保实验的一致性和可重复性。在体外实验中，研究人员使用利伐沙班在1或10 μg/mL浓度下处理VICs，并在24小时和48小时后评估NF-κB和BMP-4的表达水平。通过免疫荧光染色和图像分析，他们发现利伐沙班在抑制NF-κB和BMP-4方面具有显著效果，且这种效果随时间延长而增强。

在临床数据的分析中，研究人员测量了患者的血清中多种指标，包括TGF-β、MMP-9、IL-6和纤维蛋白原等。他们发现，接受DOAC治疗的患者在这些指标上的水平均低于未接受治疗的患者，且与治疗时间呈负相关。这些结果表明，DOACs可能通过调节这些因子的表达，对AS患者的病情产生积极影响。

### 临床观察与结果分析

研究结果显示，接受DOAC治疗的AS患者其瓣膜钙化标志物如骨钙素的表达水平显著低于未接受治疗的患者。此外，DOAC治疗还与较低的瓣膜厚度相关，这可能意味着瓣膜组织的重塑和纤维化程度有所降低。研究团队还发现，DOAC治疗时间与血清MMP-9和IL-6水平呈负相关，这表明长期使用DOACs可能有助于抑制组织重塑和炎症反应，从而减缓AS的进展。

然而，研究也指出了一些局限性。首先，样本量相对较小，特别是DOAC治疗组的患者数量有限，这可能影响某些分析的统计效力。其次，DOACs的种类不同，而实验中仅使用了利伐沙班，这可能限制了研究结果的普遍适用性。此外，研究主要关注了VICs，而忽略了主动脉瓣内皮细胞（VECs）的作用，尽管已有研究指出DOACs对VECs也有影响。因此，未来的研究应包括对VECs的分析，以更全面地了解DOACs对瓣膜病理变化的影响。

### 未来研究方向

尽管本研究提供了重要的证据，表明DOACs可能通过抗炎和抗钙化作用减缓AS的进展，但仍需进一步的临床和基础研究来验证这些发现。未来的研究应考虑更大的患者群体，以便更准确地评估DOACs的长期效果。此外，应探索不同DOACs对瓣膜钙化和炎症的潜在影响，以及它们对相关信号通路如Runx2、碱性磷酸酶、Smads和Wnt/β-连环蛋白等的作用。通过蛋白质组学和基因组学分析，可以更深入地了解DOACs对AS的分子机制。

总体而言，这项研究为DOACs在AS治疗中的潜在应用提供了新的视角。虽然目前的证据尚不足以支持其作为常规治疗手段，但其抗炎和抗钙化的作用提示我们，DOACs可能在某些情况下对AS患者具有保护性价值。进一步的研究将有助于明确DOACs在AS治疗中的具体作用机制，并为临床实践提供更有力的支持。