中药洗剂多维质控新策略：金松止痒洗剂的HPLC与B-Z振荡指纹图谱及体外抗氧化活性关联分析

《Microchemical Journal》：A multidimensional quality control strategy for traditional Chinese medicine lotions: HPLC, B-Z oscillation fingerprinting, and in vitro antioxidant activity of Jinsong antipruritic lotion

本研究针对中药外用洗剂质量评价难题，以金松止痒洗剂(JSAL)为研究对象，创新性地整合HPLC指纹图谱、B-Z振荡非线性化学指纹图谱与DPPH自由基清除活性评价，建立了化学-活性关联的多维质控体系。研究发现6种指标成分（没食子酸、绿原酸、黄芩苷等）含量稳定可测，通过多元统计分析有效区分批次差异，并揭示色谱指纹峰与抗氧化活性的显著相关性，为TCM外用制剂质量一致性评价提供了新范式。

　　

外阴瘙痒和阴道炎作为常见妇科疾病，当前临床治疗主要依赖抗生素，但长期使用易导致细菌耐药性增强和菌群失调。而传统中药因其不良反应小、局部靶向作用强等特点，在妇科疾病治疗中展现出良好前景。金松止痒洗剂(JSAL)作为由九味药材组成的中药复方制剂，具有清热燥湿、杀虫止痒功效，但其成分复杂、药材产地差异和提取工艺波动易导致产品质量不稳定，直接影响临床疗效和安全性。常规质控方法如高效液相色谱(HPLC)和薄层色谱(TLC)虽能分析特定指标成分，但难以全面表征多组分制剂整体质量。更为关键的是，JSAL的治疗效果可能源于多成分的协同作用而非单一活性成分。因此，整合化学分析和生物活性评价的综合分析策略，对建立科学的中药洗剂质控体系至关重要。

本研究发表于《Microchemical Journal》，创新性地构建了HPLC指纹图谱与Belousov-Zhabotinsky(B-Z)振荡指纹图谱相结合的双重化学表征体系，并关联体外抗氧化活性评价，形成多维质控策略。研究人员收集41批JSAL样品，通过HPLC定量分析6种特征成分（没食子酸(GA)、绿原酸(CA)、黄芩苷(BCL)、汉黄芩苷(WOG)、梣酮(FL)、蛇床子素(OL)），建立指纹图谱并进行相似度评价和多元统计分析；利用B-Z振荡反应获取非线性化学指纹图谱；采用DPPH自由基清除实验评估抗氧化活性；最后通过灰色关联分析揭示化学成分与抗氧化活性的相关性。

方法学验证

通过对比样品与对照品的保留时间和紫外光谱，在234 nm波长下成功指认6个特征峰：峰4(GA)、峰11(CA)、峰20(BCL)、峰22(WOG)、峰29(FL)、峰30(OL)。方法学验证显示，6种成分的保留时间和峰面积相对标准偏差(RSD)均小于3%，表明仪器精密度、方法重复性和溶液稳定性良好。加样回收率在96.82%-103.12%之间，RSD小于3%，证明定量方法准确可靠。

含量测定结果

41批JSAL样品中6种成分含量测定显示，GA和BCL含量相对较高，平均值分别为0.285 mg/mL和0.261 mg/mL；CA、WOG、FL和OL含量较低，平均值分别为0.019 mg/mL、0.011 mg/mL、0.023 mg/mL和0.016 mg/mL。各成分含量批次间波动显著，特别是FL的RSD高达38.92%，表明原料差异或工艺参数波动可能影响产品质量一致性。

HPLC指纹图谱与相似度评价

建立HPLC指纹图谱，确定20个共有峰，以BCL为参照峰计算相对保留时间和相对峰面积。采用双参数法(TPM)进行相似度评价，宏观定性相似度(S_m)和宏观定量相似度(P_m)结果显示，多数批次S_m>0.9，但P_m波动较大，表明样品间化学成分比例存在差异。主成分分析(PCA)成功区分不同生产日期的批次，正交偏最小二乘判别分析(OPLS-DA)筛选出5个（峰2、5、13、18、20）导致批次差异的标志性成分。

B-Z振荡指纹图谱

首次将B-Z振荡反应应用于JSAL分析，通过监测Pt电极电位变化获得振荡指纹图谱。选取诱导时间(t_ind)、最高电位(E_max)、最低电位(E_min)等9个振荡参数进行PCA分析，结果显示不同批次JSAL在振荡行为上存在明显差异，为HPLC分析提供了互补信息。B-Z振荡指纹对电化学活性成分（特别是抗氧化成分）具有高灵敏度，能有效捕获HPLC可能遗漏的化学信息。

体外抗氧化活性与谱效关系

DPPH自由基清除实验显示JSAL具有显著抗氧化能力，清除率IC₅₀值为3.91 mg/mL。灰色关联分析表明，20个共有峰中15个与抗氧化活性高度相关（关联度>0.85），其中峰20(BCL)关联度最高(0.94)，其次为峰11(CA)(0.92)和峰4(GA)(0.90)。这为阐明JSAL抗氧化作用的物质基础提供了科学依据。

研究结论与意义

本研究成功构建了整合HPLC指纹图谱、B-Z振荡指纹图谱和抗氧化活性评价的多维质控体系，有效解决了复杂中药洗剂质量评价难题。定量分析显示JSAL中主要活性成分含量稳定可测，但部分成分批次间波动显著，提示需加强原料和工艺控制。HPLC指纹图谱结合化学计量学能有效区分批次化学差异，B-Z振荡指纹作为互补技术提供了电化学活性成分的整体表征。谱效关系分析揭示了化学成分与抗氧化活性的内在关联，证实多成分协同作用可能是JSAL治疗外阴瘙痒的重要机制。该研究为中药外用制剂质量一致性评价提供了新思路，建立的化学-活性关联质控策略可推广至其他中药复方制剂，对提升中药产品质量标准和保障临床疗效具有重要意义。