综述：HBV相关肝病的过继细胞疗法

《Biomedical Technology》：Adoptive cell therapy for HBV-associated liver diseases

本综述系统探讨了过继细胞疗法（ACT）在HBV相关肝病治疗中的前沿进展，重点解析了CAR-T、TCR-T及CAR-NK等技术的机制与应用。文章深入分析了靶向HBsAg、HBcAg等关键抗原的策略，并讨论了克服肝内免疫抑制微环境、细胞耗竭等挑战的创新方案，为实现HBV功能性治愈提供了多维度视角。

　　

1. 引言

乙型肝炎病毒（HBV）感染是全球肝病的重要病因，尤其在亚洲和非洲地区高度流行。尽管预防性疫苗广泛可用，HBV感染仍导致高死亡率及严重临床结局。据世界卫生组织2024年报告，全球约2.54亿人受HBV感染，每年死亡人数超百万。慢性HBV感染是肝病的主要病因，包括慢性乙型肝炎（CHB）、肝硬化和肝细胞癌（HCC）。当前治疗方案如核苷类似物（NAs）主要抑制病毒复制，但很少实现持久治愈。

过继细胞疗法（ACT）最初于20世纪80年代作为免疫缺陷疾病（如艾滋病）的实验性干预手段，现已发展为细胞免疫治疗的基石。其核心原理是利用免疫细胞的特异性识别和细胞毒性潜能，清除体内肿瘤或病毒感染的细胞，从而恢复机体免疫功能。当代ACT平台整合了工程化免疫细胞，主要包括CAR-T、TCR-T、CAR-NK和CAR-巨噬细胞（M?）。ACT在血液系统恶性肿瘤中取得突破性进展， engineered CAR-T/TCR-T疗法在B细胞淋巴瘤/白血病中驱动治愈性结果：III期数据显示反应率达70–90%，30–50%患者通过免疫重建实现≥5年无复发生存。

在CHB中，ACT通过解决两个关键局限性展现出变革潜力：cccDNA的持久性和病毒特异性T细胞的耗竭。与仅抑制病毒复制的核苷类似物不同，CAR-T、TCR-T和CAR-NK等平台通过抗原特异性识别靶向HBV感染的肝细胞，同时重振宿主免疫力。这些方法尝试通过整合基因工程与免疫效应细胞扩增，实现持久病毒控制。

2. HBV与特异性T细胞重建

2.1. HBV的病毒学特征

HBV是一种DNA病毒，属于嗜肝DNA病毒科正嗜肝DNA病毒属。结构上，HBV病毒粒子由外脂蛋白包膜和内二十面体衣壳组成，衣壳包裹病毒基因组及DNA聚合酶。其基因组是部分双链的环状DNA分子，包含四个重叠开放阅读框。这些基因编码具有结构和调节功能的蛋白质。结构上，核心抗原（HBcAg）形成病毒衣壳，而非结构蛋白质包括血清分泌的e抗原（HBeAg）、一组包膜糖蛋白（大、中、小）与PreS1、PreS2、HBsAg结合，具有逆转录酶和RNase H功能的DNA聚合酶，以及调节转录的HBV X抗原（HBx）。

进入肝细胞后，衣壳移入细胞核，其病毒DNA被重新配置为cccDNA的微小染色体形式。这种结构为全长和较短转录本的生成提供模板。肝细胞核中这种长期存在的cccDNA储库为全长前基因组RNA（pgRNA）提供模板，支持病毒复制和核心蛋白合成，以及编码HBsAg和调节因子（如HBx）的较短转录本。HBV持久性的核心是cccDNA，它逃避常规抗病毒药物，仍然是治愈的关键障碍。值得注意的是，HBV DNA片段可以整合到宿主基因组中；虽然对病毒复制不必要，但整合通常发生在活跃转录区域附近，如TERT启动子或肿瘤抑制基因位点内，破坏基因调控，激活原癌基因或沉默肿瘤抑制基因，这些效应是HBV相关HCC的关键驱动因素。

2.2. HBV中的特异性T细胞重建

在慢性HBV感染期间，肝细胞上抗原的持续展示显著限制CD8⁺ T细胞的扩增。专业抗原呈递细胞的持续刺激驱动有限库的HBV特异性T细胞耗竭，功能性和代谢性损害辅助和细胞毒性亚群。HBV特异性T细胞反应的数量和质量缺陷是导致慢性感染中HBV持久性的核心因素。此外，现有治疗策略未能实现持久病毒抑制很大程度上可归因于CHB患者中这些T细胞群体的显著损失。

HBV特异性CD8⁺ T细胞的全基因组表达分析揭示了这些细胞中深刻的代谢和能量损伤。这些研究揭示了T细胞耗竭的广泛转录模式以及基本细胞过程的中断。耗竭的HBV特异性T细胞在肝环境中表现出高水平的共抑制受体，主要是PD-1。慢性HBV感染诱导HBV特异性CD8⁺ T细胞上抑制受体的分层上调， notably CTLA-4、LAG-3、CD160、TIM-3和2B4。超过90%的这些浸润细胞共表达PD-1和2B4，而LAG-3和CD160检测水平相对较低。耗竭T细胞进一步上调TRAIL死亡受体TRAIL-R2（DR5），增加其对TRAIL介导的NK细胞细胞毒性的敏感性，这一机制可能加剧HBV特异性T细胞的抑制或耗竭。

3. HBV中的CAR-T细胞疗法

3.1. CAR-T的结构与机制

HBV CAR-T细胞疗法是一种新型细胞免疫治疗方式。这种方法涉及对患者自体T细胞或健康供体来源的T细胞进行基因修饰。这些工程化T细胞表达CAR，使其能够特异性识别病毒感染的细胞表面抗原。CAR包含三个核心功能域：通过单链可变片段（scFv）进行抗原识别，跨膜锚定，以及通过CD3ζ与共刺激分子进行细胞内信号传导。迄今为止，CAR结构已发展到第五代：第一代缺乏共刺激信号，功能有限；第二代通过整合CD28/4-1BB实现有效激活，在血液系统恶性肿瘤中取得突破；后续世代逐步整合双共刺激域、细胞因子模块和JAK-STAT域，核心目标是增强靶向精度、延长治疗效果和对抗肿瘤微环境抵抗。

CAR-T治疗机制主要涉及靶标识别、抗原结合和细胞消除的顺序行动。具体来说，CAR-T细胞检测表达指定表面抗原的靶细胞，附着于它们，并释放细胞溶解剂。这些介质直接导致病原细胞破坏或重塑局部免疫环境以缓解症状并阻止疾病进展。具体而言，CAR-T细胞通过抗体-抗原相互作用与病毒表面抗原结合，触发穿孔素和颗粒酶释放。这些介质破坏血浆膜完整性并诱导凋亡。CAR-T细胞分泌干扰素-γ（IFN-γ）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）等细胞因子，激活宿主免疫反应以抑制病毒复制和发病机制。

3.2. CAR-T在HBV特异性T细胞重建中的作用

CAR-T细胞疗法为重建HBV特异性T细胞提供了一种有前景的方法。在CHB背景下，CAR-T技术促进了避免耗竭的HBV特异性T细胞的开发，增强了抗病毒免疫力。通过减少抑制受体表达的修饰，这些细胞表现出识别和清除HBV感染的肝细胞的改进能力。这种工程方法导致体内持续抗病毒功效和HBV特异性T细胞功能的恢复。CAR-T细胞可以被设计为靶向HBV相关抗原（HBsAg和HBcAg），从而实现感染细胞的精确识别。

3.3. 临床前CAR-T细胞疗法研究进展

大多数研究集中在HBV表面抗原（HBsAg）上，它主要由小表面（S）蛋白、中（M）和大（L）蛋白组成。表面蛋白含量极高。研究显示，当用针对S蛋白的scFv构建HBsAg-CAR T细胞时，原代人T细胞获得识别体外HBsAg阳性肝细胞的能力。激活的T细胞分泌细胞因子并介导HBV感染细胞的消除，这也涉及感染肝细胞内cccDNA的清除。进一步研究发现，靶向S和L蛋白的第二代CAR-T细胞可以在体外检测可溶性HBsAg和HBsAg阳性肝细胞，促进IFN-γ和IL-2的分泌。其中，S-CAR-T细胞激活更快并分泌更多细胞因子，这可能与病毒颗粒和亚病毒颗粒上S蛋白的高表达有关，两种CAR-T细胞都能破坏HBV转染的细胞并特异性靶向HBV感染的原代肝细胞。

为了克服传统S/L蛋白靶向的缺点，研究通过探索病毒表位和开发新型抗体扩大了靶向范围。它仍然基于第二代CAR，但增强了抗突变能力，例如从HBV恢复个体的记忆B细胞克隆的4D06和4D08，表现出纳摩尔亲和力、泛基因型中和以及识别构象（4D06）或线性（4D08）表位以对抗病毒变异性。工程化为第二代CARs（CD28/CD3ζ信号传导）后，这些抗体使原代人T细胞能够在体外分泌细胞因子和裂解HBV阳性靶标，其中4D08-CAR显示基线激活减少；在慢性HBV小鼠中，两种CAR-T细胞靶向感染的肝细胞，减少感染标志物并伴有短暂转氨酶升高。同时，开发了靶向HBV大包膜蛋白PreS1区域的A14 CAR-T细胞，利用较低的PreS1循环水平最大限度地减少可溶性病毒颗粒干扰。A14 CAR-T细胞在体外对HBV感染的HepG2-NTCP细胞和原代肝细胞表现出剂量依赖性细胞毒性（81.6–92.4% killing efficiency），并在HBV感染的人源化FRG小鼠中降低血清/肝脏HBV DNA、HBsAg、HBeAg和cccDNA水平，在无HBV对照组中无脱靶毒性。

基于优化的靶向策略，通过信号域调节和scFv工程进一步推进了CAR结构设计，以提高功效和安全性。CAR结构中的scFv包含由(G4S)₃肽连接的IgG轻/重链可变区，通常保留亲本抗体特异性，分子量约30 kDa。通过将scFv与铰链区、跨膜区和细胞内域偶联，工程化了靶向HBV的CARs。ScFvs（MA18/7, G12）及其CAR/Fc连接衍生物靶向HBV包膜蛋白（L/S）抑制HBV感染和颗粒分泌，提供了一种新的HBsAg减少策略。内源性表达的靶向HBV包膜蛋白的scFv/CARs破坏病毒功能：G12-CAR（S域）阻断HBsAg分泌，而MA18/7-CAR（L域）阻止HBV细胞进入。在HDI和AAV-HBV小鼠模型中，Fc连接的G12-scFv和G12-CAR抑制血清HBsAg高达130倍。AAV递送的Fc连接G12-scFv持续抑制血清HBsAg≥8周。

在人性化和免疫活性模型中，研究开始探索第四代CAR（包含细胞因子模块）的潜力。将HBV特异性CAR-T细胞转移到免疫活性小鼠中。这些CAR-T细胞用IL-12（替代IL-2）工程化以增强体内存活和植入。在HBV转基因小鼠中，这些细胞定位于肝脏，识别复制肝细胞上的HBV包膜蛋白，并抑制病毒复制。然而，治疗诱导轻度肝毒性和短暂功效，未能实现持久治愈。由于存在整合的HBV基因组，HBV转基因小鼠模型对病毒抗原有固有耐受性，无法形成cccDNA。因此，转基因HBV小鼠仅限于模拟病毒抑制，不能完全再现T细胞介导的治愈。为了克服这一限制，使用HBV感染的人肝细胞嵌合小鼠评估了人HBsAg靶向HBs-G4m-CAR T细胞的功效。该模型是免疫缺陷的，并重建了人肝细胞，允许HBV进入和cccDNA生成，使感染永久化。体外，HBs-G4m-CAR T细胞能够识别HBV阳性细胞系和HBsAg颗粒并分泌细胞因子，但它们对HBV阳性细胞系未表现出细胞毒性。体内研究显示，HBs-G4m-CAR T细胞在肝脏中积累。它们的存在对应于血浆HBsAg和HBV-DNA水平的显著下降以及HBV核心阳性肝细胞比例的减少，而人血浆白蛋白水平不受影响，表明了一种非细胞毒性的抗病毒机制。

3.4. CAR-T在HBV中的关键挑战与局限性

尽管具有 promising 的抗病毒活性，CAR-T治疗HBV面临 significant 障碍，其中对非恶性肝细胞的 on-target off-tumor 毒性是主要关注点。临床前研究使用S/L靶向的CAR-T细胞（S-CAR, 4D06/4D08-CAR）一致报告小鼠中 transient 丙氨酸转氨酶（ALT）升高和 mild 肝细胞凋亡。虽然这种效应在动物模型中是可管理的，但 extrapolation 到人类（特别是那些有 pre-existing 肝损伤的） raises critical safety concerns，这促使了临床研究的谨慎启动。此外，细胞因子释放综合征（CRS）的风险增加了另一层复杂性：小鼠研究仅记录了 transient 炎症反应，但人类中高剂量CAR-T激活可能通过IFN-γ/TNF-α风暴加剧肝损伤，进一步突出了临床转化前 rigorous safety assessment 的必要性。

除了安全性问题，CAR-T治疗HBV还面临 multiple barriers to clinical application。首先，慢性HBV感染中的肝脏免疫抑制微环境， characterized by 高PD-L1表达、调节性T细胞（Treg）浸润和抑制性细胞因子（IL-10和TGF-β），削弱了CAR-T细胞功效。在HBV转基因小鼠中观察到20%的CAR-T细胞中PD-1表达， indicating functional exhaustion，并且尚无 robust strategy 在人类中逆转这种抑制。其次，T细胞持久性仍然不理想：在免疫活性模型中，CAR-T细胞表现出有限的体内扩增，部分原因是循环HBsAg/SVPs的抗原 overload 和慢性抗原暴露诱导的代谢耗竭。第三，HBV相关HCC中的抗原异质性使治疗复杂化：肿瘤细胞可能下调包膜蛋白（S/L）或表达突变表位以逃避CAR识别。尽管A14 CAR-T细胞（靶向PreS1，一个较少变异的表位）的临床前数据显示出改进的特异性，但更广泛的基因型覆盖仍未得到证实。最后，制造和物流挑战仍然存在，特别是对于HBV患者的个性化CAR-T生产。临床级CAR-T细胞的“个性化抗原匹配”的高成本限制了大规模探索，包括人性化CAR构建体的可扩展生产、病毒载体的质量控制和冷冻细胞的冷链物流。

3.5. 有前景的CAR-T策略

为了解决抗原异质性和脱靶毒性，双靶点CARs整合了两个独立的抗原识别域（例如，同时靶向HBsAg和HBcAg），显著增强了HBV感染细胞的特异性。在肿瘤治疗中，双靶点CAR-T细胞（例如，靶向CD19/CD20）减少了对正常B细胞的毒性。类似于HBV领域，这种设计可以防止对低HBsAg表达的正常肝细胞的误杀。此外，逻辑门控CARs采用共刺激信号依赖性激活（例如，CD40L或OX40信号），使得仅在感染肝细胞的微环境中激活，其中共刺激分子上调。这种策略在胶质母细胞瘤CAR-T治疗中已验证可减轻“旁观者效应”，并通过平衡功效和安全性为HBV治疗带来希望。

为了对抗肝脏的免疫抑制微环境，PD-1/PD-L1阻断逆转了CAR-T细胞耗竭。一项系统综述调查了工程化CAR-T细胞和抗PD-1药物的组合免疫治疗，通过在淋巴瘤和实体瘤中增强T细胞功能和缓解肿瘤微环境免疫抑制， demonstrating synergistic effects。类似机制可以缓解HBV治疗中PD-L1介导的抑制。此外，基因编辑敲除PD-1或过表达抗凋亡蛋白延长了CAR-T细胞存活。为了安全优化，整合可诱导自杀基因（例如，iCasp9）提供了紧急控制：如果发生不可控的肝损伤，用小分子激活iCasp9可迅速消除工程化细胞。这种“安全开关”设计，已批准用于同种异体CAR-T疗法， directly applicable to HBV治疗风险管理。

基于第二代CAR的研究面临肝内免疫微环境抑制、抗原异质性以及功效与肝毒性平衡等瓶颈。然而，更高世代CARs在增强T细胞持久性、重塑免疫微环境和改善低抗原识别方面的能力有望 specifically address these issues。它们的优势需要在人源化模型中进一步验证。代谢工程研究为优化CAR-T细胞在免疫抑制微环境中的功能提供了 critical insights。肿瘤学研究证实，通过GLUT1过表达增强葡萄糖代谢显著改善了低葡萄糖条件下CAR-T细胞的效应功能。这种机制与HBV治疗 particularly relevant：调节线粒体生物发生或葡萄糖转运途径可以增强CAR-T细胞在缺氧肝微环境中的代谢适应性和存活。同时，抑制mTOR signaling以促进记忆T细胞分化可能有助于形成持久的抗病毒记忆细胞池， enabling sustained immune control of HBV infection。

4. HBV中的TCR-T细胞疗法

4.1. TCR-T的结构与机制

与CAR受体的模块化结构不同，TCR由于其基本的αβ异源二聚体配置而表现出相对简单的结构。其抗原识别单元由TCRα和TCRβ链组成，每条链包含可变区和恒定区结构域。可变区中的三个互补决定区（CDRs）共同形成抗原结合界面，这对于确定抗原特异性和编程T细胞分化至关重要。天然T细胞依赖TCR-CD3复合物进行信号转导——抗原识别TCR异源二聚体与CD3二聚体（εδ、εγ和ζζ）组装形成跨膜多亚基复合物，将细胞外抗原识别转化为细胞内激活信号。这种MHC限制性识别机制有几个独特优势。与CAR只能识别细胞表面抗原不同，TCR-T可以靶向MHC呈递的细胞内抗原肽。TCR-T疗法通过识别跨越膜和细胞质靶标的广泛抗原库，展现出更广泛的治疗潜力。

在HBV感染的肝细胞中，病毒蛋白（如核心和包膜蛋白）经历蛋白酶体降解成抗原肽，在内质网中与MHC I类分子结合形成稳定复合物。这些复合物通过高尔基体运输到肝细胞表面，供TCR T细胞识别。TCR-T细胞通过CDRs特异性结合肽-MHC I复合物，触发TCR-CD3复合物的构象变化，并招募酪氨酸激酶（Lck和ZAP-70）激活PLC-γ、MAPK和PI3K-Akt信号通路。这驱动T细胞增殖、分化为效应细胞，并分泌细胞因子，如IFN-γ和TNF-α。激活的TCR-T细胞通过穿孔素/颗粒酶介导的细胞毒性和FasL-Fas诱导的凋亡消除感染的肝细胞，同时通过非细胞毒性机制抑制病毒复制。与CAR-T相比，TCR-T靶向MHC I呈递的细胞内抗原（例如，HBcAg和聚合酶），避免了循环抗原的干扰，尽管其功效取决于感染细胞中的HLA-I兼容性和MHC I表达。其识别结构性和非结构性抗原的双重能力使其能够通过细胞内处理途径破坏病毒复制， combining precision and broad specificity。

4.2. TCR-T在临床前研究中的进展

病毒载体介导的稳定表达系统是早期核心探索的方法。工程化HLA-A2限制的HBV TCRs（C18特异性TCR 6K和S20特异性TCR 4G）到逆转录病毒载体MP71中。流式细胞术证实了从健康供体和慢性HBV患者转导的T细胞中高TCR表达。体外，TCR-T细胞在低E/T比率下裂解表达HBV的HCC细胞，降低HBsAg/HBeAg水平，并抑制rcDNA/cccDNA。患者来源的细胞扩增>200倍并显示出抗病毒活性。体内，在HLA-A2⁺ HBV感染小鼠中单次注射降低血清HBsAg、HBeAg、病毒血症和肝内病毒DNA，伴有 transient ALT elevation spontaneously resolving。稳定的TCR整合对于免疫治疗中T细胞免疫记忆至关重要。与稳定工程化细胞相比，瞬时重定向T细胞显示 reduced self-renewal and memory formation。研究发现，重复输注“新鲜”重定向T细胞 sustained effector functions， counteract exhaustion，并通过增加mRNA模板可用性 enhance efficacy，表明表达持久性对于长期抗病毒治疗的重要性。

mRNA电穿孔介导的瞬时表达系统专注于安全优化。通过mRNA电穿孔设计HBV特异性TCR-T治疗，用于瞬时TCR表达。具有包膜/核心TCRs的激活T细胞识别HBV抗原，在低E/T比率（1:100）下裂解感染细胞并抑制复制，尽管TCR表达在96小时后下降。体内，单次剂量 transiently reduced viremia，而重复剂量降低HBV-DNA/HBeAg并发挥抗肿瘤作用，瞬时TCR表达 minimize persistence-related risks。通过mRNA电穿孔工程化非裂解静息T细胞（RE-T）以瞬时表达HBV TCRs，以 minimal hepatotoxicity 抑制复制。RE-T细胞显示 naive-like CD8⁺ 表型并产生IFN-γ而无细胞毒性。重复注射在体内降低病毒血症和cccDNA水平，无ALT升高。机制上，HBV抑制依赖于LTBR/APOBEC3通路激活，具有 self-limiting LTBR配体表达以避免慢性炎症。与稳定表达系统相比，瞬时表达在安全性方面更具优势，但需要多次输注以维持治疗效果，适用于肝损伤风险较高的慢性HBV患者。

4.3. TCR-T的临床转化与安全验证

在HBV相关HCC和肝移植后复发领域，早期研究已证实TCR-T的可行性。开发的TCR-A2/HBs183-91重定向T细胞靶向HLA-A0201/HBs183-91复合物。通过融合小鼠β链恒定域和引入工程化二硫键，优化了TCR的稳定性，减少了与内源性TCR链的错配。GMP级制备的细胞在临床实践中表现出良好的持久性和增殖能力。患者HBsAg水平在4周内下降约90%（从3200 IU/mL降至~300 IU/mL），肝肾功能保持稳定，无显著肝炎。该研究首次验证了HBsAg作为肝移植后HCC免疫治疗靶点的潜力。评估了mRNA电穿孔TCR-T（靶向HBsAg/HBcAg）在6例肝移植后复发性HBV相关HCC患者中的效果。多次输注（剂量范围1×10⁴至5×10⁶ cells/kg）耐受良好，仅3例出现1级发热。无CRS或神经毒性证实了mRNA-TCR-T在这种免疫抑制环境中的安全性。

新技术平台的临床探索进一步扩展了其应用边界。开发的ImmTAVs系统将亲和力优化的TCRs（通过噬菌体库筛选至皮摩尔水平）与抗CD3 scFvs融合成双特异性蛋白，可以重定向CD8⁺ T、CD4⁺ T、MAIT和γδ T细胞。它能够选择性裂解HBV阳性HCC细胞（如PLC/PRF/5-A2B2M）而不损伤健康肝细胞，并具有快速血浆清除和大规模通过大肠杆菌生产的优势。其中，靶向S肽的ImmTAV已进入I期临床试验（NCT05867056）。SCG101是首个自体TCR-T靶向HLA-A2限制的HBV包膜S20-28肽。它通过慢病毒转导实现稳定表达。TCR序列通过密码子优化策略进行优化，结合二硫键和小鼠恒定域以增强链配对保真度并降低免疫原性。在临床实践中，HBsAg可迅速降低至接近检测限。治疗效果优于RNA介导的瞬时TCR-T，器官功能稳定，安全性良好。

总体而言，传统TCR-T在降低HBV相关HCC中的病毒标志物方面显示出潜力，而mRNA瞬时表达和ImmTAVs系统更注重安全优化。SCG101通过稳定表达和结构优化在疗效上取得突破。它为慢性HBV的功能性治愈提供了新方向。

4.4. TCR-T在HBV中的关键挑战与局限性

尽管具有治疗潜力，TCR-T治疗HBV面临 distinct hurdles，包括HLA限制。TCR-T识别严格依赖于HLA-I限制的肽呈递，限制了其适用于具有特定HLA等位基因（例如，HLA-A?02:01抗原）的患者，这限制了更广泛的人群覆盖。临床前和临床数据表明，肝细胞或肿瘤细胞经常下调HLA-I表达或携带抗原肽突变（例如，基因型B/C中的HBsAg S20肽变体），从而逃避TCR-T识别。此外，与CAR-T类似，肝脏免疫抑制微环境的抑制影响TCR-T功能。例如，在SCG101试验中，T细胞 developed a stem cell-like memory phenotype，但在晚期纤维化患者中显示功能减少。

On-target toxicity remains a critical concern，因为TCR-T细胞可能攻击HLA-I阳性HBV抗原表达的肝细胞，导致 transient elevation of alanine transaminase（ALT）。在一个临床案例中，SCG101给药引起4级ALT升高（1404 U/L）， due to targeted lysis of HBsAg⁺ hepatocytes，尽管这个问题通过支持 care resolved。尽管工程策略（例如，小鼠恒定域融合和二硫键稳定）减少了内源性TCR链错配的脱靶效应，但来自交叉反应TCRs的自身免疫风险仍然存在。此外，HBV-HCC中的抗原异质性，其中 only a part of tumor cells express target antigens（例如，治疗前活检中10%的肝细胞表达HBsAg）， greatly limits therapeutic efficacy，如在I期试验中，所有患者尽管TCR-T持久性仍表现出疾病进展。生产挑战，包括符合GMP的慢病毒生产以实现稳定TCR表达和冷冻细胞的冷链物流， further complicate clinical translation。TCR-T细胞持久性和记忆形成也 pose additional hurdles。与CAR-T细胞不同，来自慢性HBV患者的TCR-T细胞 often exhibit impaired self-renewal。在临床前模型中，用mRNA-TCR工程化的静息T细胞（RE-T）显示 transient antiviral activity but limited long-term memory， requiring repeated infusions to maintain efficacy。

4.5. 有前景的TCR-T策略

在肿瘤学中，双靶点TCR-T细胞通过同时识别抗原（如MUC1和CEA） demonstrated enhanced efficacy against solid tumors and reduced off-target toxicity。这种多抗原靶向策略有潜力转化为HBV治疗。设计靶向HBcAg和HBxAg的双特异性TCRs可以利用病毒抗原的共表达改善感染肝细胞的识别， thereby mitigating immune escape mediated by single antigen mutations。进一步扩展这种方法以开发同时靶向HBsAg、HBcAg和HBeAg的三特异性TCRs may establish a more comprehensive antigen recognition network，显著增强HBV感染细胞的清除。

此外，敲除PD-1基因可以逆转TCR-T细胞耗竭并延长其在免疫抑制微环境中的存活。这种基因编辑策略可用于治疗HBV，通过逆转肝窦状隙巨噬细胞诱导的T细胞功能抑制。过表达4-1BB共刺激域可以增强TCR-T细胞在肿瘤微环境中的增殖。类似地，修改HBcAg特异性TCR-T细胞的共刺激信号通路可能有助于克服肝纤维化微环境中PD-L1+细胞的抑制。

表观遗传调控研究为改善TCR-T细胞治疗的持久性开辟了新途径。它还调节信号通路，同时抑制抗原呈递和削弱T细胞浸润。研究表明，KDM5A调节肿瘤细胞中的PD-L1表达，同时抑制抗原呈递和削弱T细胞浸润。KDM5A抑制剂（如D18）可以阻断其去甲基化活性，增加H3