虎力散乙醇提取物的体内抗炎镇痛作用及化学成分研究

《Journal of Ethnopharmacology》：In vivo anti-inflammatory, analgesic activities and phytochemical profile of Hu Lisan ethanol extract

本研究针对传统民族药虎力散(HLS)剂型单一、作用机制不明的问题，系统评价了其乙醇提取物(HLS-EE)的化学成分、急性毒性及药理活性。通过UPLC-MS/MS鉴定出156种成分，LD50为2.962 g/kg。药效学研究表明HLS-EE通过调控TNF-α、IL-6、IL-1β、COX-2、PGE2等炎症介质及c-Fos、5-HT2A、KOR等镇痛靶点，显著优于市售胶囊剂，为民族药新剂型开发提供科学依据。

　　

在传统医学宝库中，云南少数民族世代相传的虎力散（Huli San, HLS）以其卓越的祛风除湿、活血止痛功效闻名，常用于治疗风湿疼痛、筋骨麻木及跌打损伤。然而，与现代医药相比，这类民族药往往面临剂型传统、质量控制不稳定、作用机制不明确等挑战，限制了其更广泛的应用和开发。当前，炎症和疼痛是许多疾病的核心症状，尤其是膝骨关节炎、类风湿关节炎等，严重影响患者生活质量。西医主要依靠非甾体抗炎药（如布洛芬）、糖皮质激素（如地塞米松）和阿片类镇痛药（如吗啡）进行治疗，虽然起效快，但长期使用易导致胃肠道损伤、肝肾毒性、成瘾性和心血管风险等副作用。相比之下，中药复方具有多靶点、整体调节的特点，安全性通常更高。虎力散由草乌（Aconitum vilmoriniannum Kom, AK）、三七（Panax notoginseng (Burk.) F. H. Che, PN）、青羊参（Cynanchum wallichii Wight, CW）和金钱豹（Campanumoea javanica BI, CJ）四味药材组成，但其现代药理研究，特别是针对其优化提取物的系统评价尚属空白。为了将这一民族瑰宝转化为质量可控、疗效更优的现代制剂，研究人员开展了一项深入的研究，相关成果发表在《Journal of Ethnopharmacology》上。

本研究主要运用了几项关键技术方法。研究人员首先采用超高效液相色谱-串联质谱法（UPLC-MS/MS）对虎力散乙醇提取物（HLS-EE）的化学成分进行了全面分析。通过急性毒性试验确定了其半数致死量（LD₅₀）并观察了主要器官的病理变化。在药效学评价方面，研究团队建立了多种经典的小鼠模型：利用二甲苯致耳肿胀、角叉菜胶致足肿胀和醋酸致血管通透性模型评估抗炎活性；通过醋酸扭体法、热板法和福尔马林致痛法评价镇痛效果。此外，还通过酶联免疫吸附测定（ELISA）检测了血清中的炎症因子水平，并通过分子生物学技术检测了相关蛋白和基因的表达。所有动物实验均遵循伦理规范。

Phytochemical Profiling of the HLS-EE

通过UPLC-MS/MS分析，研究人员从HLS-EE中成功鉴定出156种化学成分，为其复杂的药理活性提供了物质基础。总离子流图展示了丰富的成分信息，初步鉴定的36种成分详细信息见文中表格，这为后续的质量控制和机制研究奠定了基础。

Acute toxicity

急性毒性试验结果显示，HLS-EE对小鼠的LD₅₀为2.962 g/kg。病理学检查发现，在15倍临床剂量（CLD）下，小鼠心、肝、脾、肺、肾等重要器官未见明显异常；然而，当剂量升高至90倍和120倍CLD时，多个器官出现了炎性细胞浸润，提示在高剂量下存在潜在毒性风险，这为临床安全用药剂量范围的设定提供了重要参考。

Anti-inflammatory effects

在抗炎药效评价中，HLS-EE表现出显著活性。它能够有效抑制二甲苯引起的小鼠耳肿胀、角叉菜胶引起的足爪肿胀以及醋酸引起的血管通透性增加。尤为重要的是，中、高剂量的HLS-EE组在这些模型中的抑制效果均强于市售的虎力散胶囊（HLS-C）。机制探讨表明，在耳肿胀模型小鼠的血清中，HLS-EE降低了肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）和白细胞介素-1β（IL-1β）的水平。在足爪肿胀模型中，HLS-EE不仅降低了IL-1β、IL-6、TNF-α、前列腺素E₂（PGE₂）、一氧化氮（NO）和丙二醛（MDA）的含量，还提高了超氧化物歧化酶（SOD）的活性。此外，在足爪组织中，HLS-EE下调了环氧合酶-2（COX-2）、IL-6、TNF-α和细胞外信号调节激酶1/2（Erk_1/2）的蛋白和mRNA表达水平，表明其通过多靶点抑制炎症信号通路和氧化应激发挥抗炎作用。

Analgesic effects

在镇痛实验中，HLS-EE同样表现出色。它能显著减少醋酸引起的小鼠扭体反应，延长热板实验中的痛觉潜伏期，并抑制福尔马林引起的双相疼痛反应。中、高剂量的HLS-EE其镇痛效果优于HLS-C。对扭体实验小鼠的血清分析显示，5-羟色胺（5-HT）、IL-1β和PGE₂水平下降；对福尔马林实验大鼠的血清分析显示IL-1β和IL-6水平降低。进一步的脊髓组织分析发现，HLS-EE下调了细胞原癌基因fos（c-Fos）、5-羟色胺2A受体（5-HT_2A）、κ阿片受体（KOR）和前强啡肽（PDYN）的mRNA表达，这提示HLS-EE的镇痛作用不仅涉及外周炎症因子的调控，还可能通过影响中枢神经系统的疼痛信号传导通路来实现。

Discussion

讨论部分对上述发现进行了深入分析。虎力散中各药材的活性成分是其功效的核心。草乌（AK）中的生物碱（如双氢罂粟碱、乌头碱等）可通过作用于钠离子通道抑制疼痛传导，并调节T细胞功能抑制过度免疫反应。三七（PN）富含皂苷类成分（如三七皂苷R1、人参皂苷Rg₁），能抑制髓样分化初级反应蛋白88（MyD88）和核因子κB（NF-κB）信号通路，从而减少COX-2、IL-1β等炎症介质的产生。青羊参（CW）中的C₂₁甾体苷类成分可调节瞬时受体电位香草素亚型1（TRPV1）通道，抑制P物质等神经肽的释放，并能抑制NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3（NLRP3）炎症小体的活化。金钱豹（CJ）中的多糖和皂苷则通过增强抗氧化防御和调节免疫稳态发挥作用，其皂苷成分还能激活μ阿片受体并抑制COX-2/PGE₂通路。HLS-EE的综合功效正是这些成分协同作用的结果，体现了中药复方多成分、多靶点、整体调节的特点。与市售胶囊（HLS-C，原料为生药粉）相比，乙醇提取工艺（HLS-EE）可能更有效地富集了这些活性成分，从而表现出更强的生物活性，这为开发虎力散的新型外用制剂（如凝胶、贴剂）提供了强有力的实验依据，有望解决原料药粉载药量低、透皮吸收差的问题。

Conclusion

综上所述，本研究系统阐明了虎力散乙醇提取物（HLS-EE）的化学组成（156种成分）、安全性（LD₅₀为2.962 g/kg）及其卓越的抗炎镇痛药理活性。其作用机制涉及“抑制炎症因子—阻断炎症信号通路—调节氧化应激—增强内源性镇痛系统”的多靶点协同过程，且中、高剂量HLS-EE的效果优于市售胶囊。该研究不仅为虎力散的临床应用提供了详实的现代科学证据，也为其后续剂型改良和深度开发，乃至民族药物的现代化研究与利用奠定了坚实的基础。