解郁五味四逆散通过PLD2通路调控突触可塑性改善CUMS小鼠抑郁样行为

《Journal of Ethnopharmacology》：Jieyu Wuwei Sinisan formula alleviates depression-like behaviors in CUMS mice by regulating synaptic plasticity through PLD2 pathway

本研究针对抑郁症发病机制不清和治疗靶点有限的问题，围绕中药复方解郁五味四逆散(JWS)的抗抑郁作用展开研究。通过CUMS抑郁模型结合非靶向代谢组学技术，发现JWS可通过上调PLD2表达、调节甘油磷脂代谢通路，改善前额叶皮层突触可塑性，从而发挥抗抑郁作用。该研究为JWS的临床应用提供了实验依据，也为抑郁症发病机制研究提供了新思路。

　　

在当今快节奏的社会中，抑郁症已成为困扰全球约3.5亿人的常见精神障碍。这种疾病不仅表现为持续的情绪低落、兴趣减退等核心症状，还常常伴随着焦虑状态，给患者带来巨大的身心痛苦。更令人担忧的是，抑郁症患者合并焦虑症状时，治疗过程中更容易出现不良事件。尽管现代医学对抑郁症的认识不断深入，但其确切的发病机制仍有待阐明，这也在一定程度上限制了治疗策略的发展。

在中医学理论体系中，抑郁症的核心病机与"肝气郁结"密切相关。基于这一理论，源自《伤寒论》的四逆散作为疏肝解郁的经典方剂，在临床上展现出良好的抗抑郁效果。解郁五味四逆散(Jieyu Wuwei Sinisan Formula, JWS)正是在四逆散基础上加入贯叶连翘等药物化裁而来，其抗抑郁作用已得到临床实践的初步验证。

前额叶皮层(Prefrontal Cortex, PFC)作为调控情绪和认知功能的关键脑区，在抑郁症的病理生理过程中扮演着重要角色。近年来提出的抑郁症"突触假说"强调，大脑特定区域（如PFC）的突触连接丢失和神经可塑性受损是抑郁症的核心病理改变。同时，越来越多的证据表明，脂质代谢异常，特别是甘油磷脂代谢紊乱，与抑郁症的发病过程密切相关。磷脂酶D(Phospholipase D, PLD)作为甘油磷脂代谢通路中的关键信号酶，其亚型PLD2在脑发育和认知功能中发挥着重要作用。

基于这些科学背景，研究人员提出一个创新性科学问题：JWS的抗抑郁作用是否与调节PLD2通路、改善突触可塑性有关？为了回答这个问题，研究团队开展了一系列严谨的实验研究。

本研究主要采用了以下几个关键技术方法：首先通过高效液相色谱建立JWS的指纹图谱；利用慢性不可预知温和应激(Chronic Unpredictable Mild Stress, CUMS)建立小鼠抑郁模型；采用包括糖水偏好实验、高架十字迷宫等行为学测试评估抑郁样行为；运用苏木精-伊红(Hematoxylin-Eosin, HE)染色和尼氏染色观察前额叶皮层病理变化；通过液相色谱-质谱联用技术进行非靶向代谢组学分析；使用 ingenuity pathway analysis (IPA)筛选潜在关键蛋白；最后通过Western blot(WB)、高尔基染色和透射电子显微镜等技术进行靶点验证。

Effect of JWS on CUMS-induced depression related behaviors

研究人员通过建立CUMS抑郁模型，系统评估了JWS对抑郁相关行为的影响。实验结果显示，经过6周CUMS造模后，小鼠出现明显的快感缺失现象，表现为糖水偏好度显著降低。而不同剂量的JWS干预均能改善这种抑郁样行为。在高架十字迷宫实验中，CUMS显著增加了小鼠的焦虑指数，JWS治疗则有效降低了这一指标。这些行为学结果表明，JWS不仅能缓解抑郁样行为，还对伴随的焦虑状态具有改善作用。

器官指数评价结果

器官指数评价结果显示，JWS各剂量组与正常对照组相比无显著差异，表明JWS在实验剂量范围内具有良好的安全性，为其临床应用提供了安全性依据。

HE和尼氏染色结果

通过HE染色和尼氏染色对前额叶皮层组织病理学变化的观察发现，CUMS导致PFC出现明显的病理损伤，而JWS治疗能够逆转这种损伤，保护神经元结构的完整性。

非靶向代谢组学分析结果

对细胞外液和PFC脑组织进行的非靶向代谢组学分析揭示了重要的代谢通路变化。结果显示，甘油磷脂代谢通路是对照组、CUMS组和JWS组之间的关键差异代谢通路。这一发现将JWS的抗抑郁作用与脂质代谢调节联系起来，为阐明其作用机制提供了重要线索。

IPA分析和靶点验证

结合文献研究和IPA分析，研究人员将目光聚焦于磷脂酶D(PLD)这一关键蛋白靶点。通过ELISA和Western blot实验发现，CUMS显著降低了PFC中PLD2的活性和蛋白表达水平，而JWS治疗则能上调PLD2的表达。这一结果明确了PLD2在JWS抗抑郁作用中的关键地位。

机制研究结果

进一步的机制研究揭示，JWS通过上调PLD2通路，调节突触可塑性，从而发挥抗抑郁作用。高尔基染色和透射电子显微镜观察结果证实，JWS能改善CUMS引起的突触结构异常，增强神经可塑性。

本研究通过多角度、多层次的实验设计，系统阐明了JWS的抗抑郁作用及其分子机制。主要研究结论包括：首先，JWS能有效改善CUMS诱导的小鼠抑郁样行为和焦虑状态，且具有良好的安全性；其次，JWS能逆转CUMS引起的PFC病理损伤，保护神经元结构完整；第三，甘油磷脂代谢通路是JWS发挥抗抑郁作用的关键代谢通路；第四，PLD2是JWS作用的重要靶点，JWS通过上调PLD2表达，改善突触可塑性，从而发挥抗抑郁作用。

这些发现不仅证实了JWS的安全性和有效性，还深入揭示了其抗抑郁的作用机制，为JWS的临床应用提供了坚实的实验依据。特别是在抑郁症常伴随焦虑状态的临床背景下，JWS显示出独特的治疗优势。此外，该研究首次将中药复方的抗抑郁作用与PLD2通路、突触可塑性调节联系起来，为抑郁症的发病机制研究提供了新的视角，也为传统中药的现代化研究提供了范例。

值得注意的是，本研究采用了先进的微透析技术结合代谢组学分析，能够实时监测脑内代谢物的动态变化，这一技术路线的创新为深入研究中药复方的作用机制开辟了新途径。研究结果不仅有助于推动JWS在临床的应用，也为其他中药复方的作用机制研究提供了可借鉴的研究思路和方法学参考。