用于诊断肺孢子菌肺炎（Pneumocystis jirovecii pneumonia）的实时PCR检测方法的标准化与临床评估

《Mycopathologia》：Standardization and Clinical Evaluation of a Real-Time PCR Assay for the Diagnosis of Pneumocystis jirovecii Pneumonia

本研究标准化并验证了针对Pneumocystis jirovecii mtLSU rRNA基因的qPCR检测方法，在阿根廷患者呼吸道样本中应用，结果显示检测限8.8 copies/μL，无交叉反应，灵敏度95.5%，特异性95.8%，但需结合临床数据解读Ct值36-37.8的灰色区域。

　　

摘要

背景

Pneumocystis jirovecii肺炎（PjP）是对免疫功能低下者构成生命威胁的感染性疾病。其诊断仍然具有挑战性，尤其是在显微镜检查结果为阴性的情况下。本研究旨在标准化并验证一种针对mtLSU rRNA基因的qPCR检测方法，以检测阿根廷患者呼吸道样本中的P. jirovecii DNA。

材料与方法

该检测方法使用含有目标基因的质粒稀释液进行了优化。通过检测60种真菌、21种分枝杆菌和16种细菌来评估其分析特异性。临床验证包括101份来自症状患者的呼吸道样本和37份来自健康个体的样本。所有反应中都加入了内部阳性对照（IPC）以检测潜在的抑制剂。

结果

qPCR检测方法的检测限为8.8拷贝/μL，且无交叉反应现象。在显微镜确诊的病例中，95.5%的病例检测结果为阳性。值得注意的是，14.9%的显微镜检查结果为阴性但临床符合PjP特征的病例也检测出阳性。ROC分析显示AUC值为0.96，最佳Ct临界值为≤36，灵敏度为90.7%，特异性为95.8%。所有健康对照组样本均检测结果为阴性。观察到一个“灰色区域”（Ct值在36–37.8之间），需要结合临床数据进行进一步分析。

结论

这种qPCR检测方法具有高灵敏度和高特异性，是诊断PjP的宝贵工具。其性能支持其在常规诊断中的应用，尤其是在显微镜检查结果不确定的情况下。然而，对于灰色区域的结果解读需要结合临床或其他生物标志物数据。