KHSRP下调通过抑制HMGB1转录增强非小细胞肺癌对卡铂的敏感性

《Hereditas》：Downregulation of KHSRP enhances carboplatin sensitivity in non-small cell lung cancer

本研究针对非小细胞肺癌(NSCLC)卡铂耐药这一临床难题，探讨了KHSRP基因在调控化疗敏感性中的作用机制。研究人员通过体外实验发现KHSRP可通过转录激活HMGB1促进NSCLC细胞增殖、迁移和上皮-间质转化(EMT)，而敲低KHSRP能显著增强卡铂对A549细胞的抑制作用。动物实验进一步证实KHSRP下调可提高荷瘤小鼠对卡铂的敏感性。该研究为克服NSCLC化疗耐药提供了新的潜在靶点。

　　

肺癌是全球发病率和死亡率最高的恶性肿瘤，其中非小细胞肺癌(NSCLC)占主要类型。尽管铂类化疗药物卡铂是晚期NSCLC的一线治疗方案，但耐药性的产生严重影响了治疗效果。寻找增强化疗敏感性的新靶点成为当前研究的热点。

KH型剪接调节蛋白(KHSRP)作为一种多功能RNA结合蛋白，在肿瘤发展中扮演重要角色，但其在NSCLC化疗敏感性调控中的作用尚未明确。值得注意的是，KHSRP被发现能够激活高迁移率族蛋白B1(HMGB1)的转录，而HMGB1作为一个癌基因，已知会影响化疗敏感性。这引发了研究人员的思考：KHSRP是否通过HMGB1影响NSCLC的化疗反应？

为了回答这一问题，温宝等人发表在《Hereditas》上的研究系统探讨了KHSRP在调控NSCLC卡铂敏感性中的作用机制。研究发现不仅证实了KHSRP在NSCLC细胞中的高表达现象，更首次揭示了KHSRP通过转录调控HMGB1影响卡铂敏感性的新机制。

研究人员采用了一系列关键技术方法开展研究：通过qRT-PCR和Western blotting检测基因表达；利用CCK-8法和集落形成实验评估细胞活力和增殖；采用流式细胞术分析细胞凋亡；通过伤口愈合实验和Transwell实验观察细胞迁移和侵袭能力；运用荧光素酶报告基因实验分析转录调控机制；并建立A549细胞裸鼠移植瘤模型进行体内验证。

KHSRP表达在NSCLC细胞中上调

研究团队首先检测了KHSRP在NSCLC细胞系中的表达水平。与正常支气管上皮细胞16HBE相比，A549、H1299和H1975三种NSCLC细胞中KHSRP的mRNA表达均显著升高，其中A549细胞的KHSRP表达水平最高，因此被选为后续实验对象。研究人员成功构建了KHSRP敲低和过表达的A549细胞模型，为后续功能研究奠定了基础。

KHSRP增强NSCLC细胞的增殖、迁移和侵袭能力

通过CCK-8实验、集落形成实验、流式细胞术、伤口愈合实验和Transwell侵袭实验，研究人员系统评估了KHSRP对NSCLC细胞恶性表型的影响。结果显示，KHSRP过表达显著促进A549细胞的活力、增殖、迁移和侵袭，而KHSRP敲低则产生相反效果，抑制细胞增殖和迁移，同时诱导细胞凋亡。这些发现表明KHSRP在NSCLC中发挥促癌基因的作用。

KHSRP促进HMGB1转录并上调HMGB1基因表达

机制研究表明，KHSRP能够显著增强HMGB1启动子的荧光素酶报告基因活性，而KHSRP敲低则降低该活性，证实KHSRP可转录激活HMGB1。Western blot结果进一步显示，KHSRP过表达上调HMGB1蛋白水平，敲低则产生相反效果，表明KHSRP在转录和翻译水平均调控HMGB1表达。

KHSRP促进NSCLC细胞的上皮-间质转化(EMT)

研究人员检测了EMT标志物的表达变化，发现KHSRP敲低导致上皮标志物E-钙黏蛋白表达增加，间质标志物N-钙黏蛋白和波形蛋白表达降低，同时增殖相关蛋白Ki67表达下降。相反，KHSRP过表达产生相反效果，表明KHSRP通过调控EMT过程影响NSCLC细胞的恶性进展。

KHSRP敲低增强NSCLC细胞对卡铂的敏感性

研究人员进一步探讨了KHSRP对卡铂敏感性的影响。结果显示，卡铂以时间和剂量依赖方式抑制A549细胞活力，72小时处理的半数抑制浓度(IC₅₀)为18.92μg/mL。值得注意的是，KHSRP敲低显著增强了卡铂对A549细胞增殖、迁移的抑制作用和促凋亡效应，而KHSRP过表达则减弱了卡铂的疗效。同时，KHSRP敲低与卡铂联用进一步抑制了HMGB1表达和EMT过程。

KHSRP敲低在体内增强NSCLC细胞对卡铂的敏感性

体内实验进一步证实了上述发现。在A549细胞移植瘤模型中，KHSRP敲低与卡铂治疗均能抑制肿瘤生长，而两者联用产生更强的抑瘤效果。H&E染色显示联合治疗组肿瘤坏死区域增加，TUNEL检测表明细胞凋亡显著增强。Western blot分析显示联合治疗进一步降低了KHSRP、HMGB1和EMT标志物的表达。

本研究首次证实KHSRP在NSCLC细胞中高表达，并通过转录激活HMGB1促进肿瘤增殖、迁移和EMT过程。更重要的是，研究发现KHSRP沉默能够通过抑制HMGB1转录增强NSCLC对卡铂的敏感性。这些发现不仅阐明了KHSRP在NSCLC化疗耐药中的新机制，而且为克服临床卡铂耐药提供了潜在的治疗靶点。靶向KHSRP可能成为提高NSCLC化疗疗效的有前景策略，为改善患者预后提供了新的理论依据。