在毕赤酵母（Pichia pastoris）中产生的VEGF的脱糖作用会降低其在体外的结合能力和促血管生成效果

《Biotechnology Journal》：Deglycosylation of VEGF Produced in Pichia pastoris Reduces its in Vitro Binding and Angiogenic Effect

本研究利用毕赤酵母表达重组人VEGF165，通过酶解去除糖基后，比较了糖基化（yVEGFg）与非糖基化（yVEGFdg）形式与抗VEGF抗体（bevacizumab）的结合能力及对HUVEC增殖的影响。实验表明，糖基化形式显著提升VEGF的体外结合动力学和促血管生成活性，部分糖基化形式甚至优于哺乳动物表达的VEGF。结果强调了糖基化对VEGF功能的重要性。

　　

摘要

血管内皮生长因子（VEGF）是一种关键的促血管生成糖蛋白，在研究和治疗应用中都具有重要意义。虽然Pichia pastoris（Komagataella phaffii）提供了一种经济高效的重组VEGF表达系统，但其糖基化模式与哺乳动物系统存在显著差异，而这些修饰的影响尚未得到充分研究。重组人VEGF165在P. pastoris中表达后，通过肝素亲和层析法纯化，并使用Endo H进行酶法去糖基化。去糖基化形式（yVEGF_dg）和未去糖基化形式（yVEGF_g）均通过ELISA和SPR方法检测其与抗VEGF抗体贝伐单抗的结合能力，并通过HUVEC增殖实验评估其生物活性。同时，还与哺乳动物来源的VEGF进行了比较分析。结果表明，去糖基化的VEGF与贝伐单抗的结合亲和力较低，对内皮细胞的增殖作用也较弱。尽管N-糖基化位点在结构上远离受体/抗体表位，但糖基化仍增强了VEGF的体外结合动力学和促血管生成活性。来自P. pastoris的部分糖基化VEGF在诱导内皮细胞增殖方面甚至优于哺乳动物来源的VEGF。这些发现表明，糖基化显著改善了在P. pastoris中产生的重组VEGF的功能特性，强调了糖基化控制对于开发生物活性VEGF的重要性。

利益冲突

作者声明没有利益冲突。