关于犊牛支气管肺泡灌洗液差异计数中需统计的细胞数量的比较研究

《Research in Veterinary Science》：Comparison study on numbers of cells to count in differential counts of bronchoalveolar lavage fluid from calves

牛支气管肺泡灌洗液细胞计数准确性及时间效率研究。比较200、300和500细胞计数的诊断准确性，发现300细胞计数与500细胞结果一致性高（Macrophages: -3.6~4.0%, Neutrophils: -4.1~3.7%, Lymphocytes: -1.6~1.8%），且显著减少检测时间。研究采用Passing-Bablok分析和Bland-Altman图验证，证实300细胞计数可替代传统500细胞标准，为临床提供快速诊断方案。

　　本研究聚焦于奶牛呼吸道疾病（RTI）的诊断方法，特别关注了小体积、非支气管镜的支气管肺泡灌洗液（BALf）在呼吸道细胞学分析中的应用。研究对象为134头表现出至少一项呼吸道疾病临床症状的奶牛，来自29个牧场，主要是荷斯坦弗里斯兰和比利时蓝品种。研究目的是评估在BALf细胞涂片样本中，基于200、300和500个细胞进行差异计数分析的可行性，旨在减少检测所需的时间，提高诊断效率。

呼吸道疾病在奶牛群体中仍然非常普遍，尤其是在集约化饲养环境下，这类疾病不仅影响奶牛的健康和生产性能，还显著增加了抗生素的使用量。抗生素的过度使用导致了抗生素耐药性的上升，这在兽医领域和畜牧业中都引起了广泛关注。因此，快速、准确的诊断方法成为减少抗生素滥用、保护动物健康的重要手段。目前，病理学检查常用于识别引起呼吸道疾病的病原体，而细胞学分析则有助于评估呼吸道感染和气道炎症的状况。然而，细胞学分析的一个主要限制是其耗时性，特别是在进行差异计数时，需要对大量细胞进行观察和分类，这在实际操作中可能限制了其广泛应用。

细胞学分析在人类和马匹中已有较为成熟的应用，常用于诊断和监测由空气传播的非感染性因子引起的气道炎症，如颗粒物、有毒气体和环境过敏原。这些非感染性因子在哮喘和慢性阻塞性肺病等疾病中具有重要作用。此外，细胞学分析还与蛋白质组学和细胞因子分析相结合，用于研究炎症过程以及免疫调节治疗的效果。然而，在奶牛中，尽管存在一些可行的采样技术，如非支气管镜的支气管肺泡灌洗（nBAL），细胞学分析仍较少被纳入科研项目和常规诊断流程。

nBAL是一种相对简单、成本较低的采样方法，它不需要使用支气管镜，只需通过小体积的灌洗液即可获取样本。这种方法在比利时、法国、荷兰和爱尔兰等国家被广泛用于诊断实验室的下呼吸道样本采集。然而，由于其采样过程的特性，nBAL样本中可能含有更多的支气管成分，这在一定程度上可能影响细胞学分析的准确性。此外，由于样本需要从农场运输到实验室，这可能延长了从采样到细胞学准备的时间，进一步限制了其在临床中的应用。

为了克服这些挑战，本研究尝试在BALf样本中使用较少的细胞数量进行差异计数，以评估其是否能够提供与500个细胞计数相似的诊断信息。研究中采用了200、300和500个细胞的计数方法，并通过统计分析方法如Passing-Bablok分析和Bland-Altman图来评估不同计数方法之间的差异。研究结果显示，对于300个细胞的计数，所有细胞类型的容忍区间均低于所设定的最大临床可接受差异，这表明300个细胞的计数方法在诊断上是可靠的。相比之下，200个细胞的计数方法在某些细胞类型上的容忍区间略高于所设定的阈值，这表明其可能不如300个细胞计数方法精确。

尽管如此，研究发现，使用200个细胞进行计数在某些情况下仍然可以提供有用的信息。特别是在常规诊断中，如果能够接受一定的误差范围，减少细胞计数的数量可以显著提高检测效率。此外，研究还发现，虽然部分样本中存在嗜酸性粒细胞，但由于其数量较少，难以进行精确的分析。因此，研究结果强调了在奶牛中使用300个细胞进行差异计数的可行性，这不仅可以提高诊断效率，还能为后续的标准化指南提供依据。

研究还指出，由于细胞学分析的耗时性，其在实际应用中受到一定限制。因此，寻找一种能够在不影响诊断准确性的前提下，减少检测时间的方法，对于提高诊断效率和推广细胞学分析在奶牛中的应用具有重要意义。本研究的结果表明，300个细胞的计数方法在诊断上是可靠的，这为未来的临床实践提供了参考。同时，研究还强调了在细胞学分析中结合其他诊断方法的重要性，如蛋白质组学和细胞因子分析，以全面评估炎症过程和免疫调节治疗的效果。

此外，研究还提到，由于nBAL样本中可能含有较多的支气管成分，这在一定程度上可能影响细胞学分析的准确性。因此，需要在采样过程中尽量减少支气管成分的干扰，以提高细胞学分析的可靠性。同时，样本的运输时间也会影响细胞学分析的结果，因此需要优化样本的运输流程，以确保细胞学分析能够在最佳条件下进行。

综上所述，本研究通过比较200、300和500个细胞的计数方法，评估了其在奶牛呼吸道疾病诊断中的可行性。研究结果显示，300个细胞的计数方法在诊断上是可靠的，这为未来的临床实践提供了参考。同时，研究还强调了在细胞学分析中结合其他诊断方法的重要性，以全面评估炎症过程和免疫调节治疗的效果。此外，研究还指出，减少细胞计数数量可以显著提高检测效率，这为推广细胞学分析在奶牛中的应用提供了可能。研究结果对于提高奶牛呼吸道疾病的诊断效率和减少抗生素滥用具有重要意义。