在具有人源化肝脏的嵌合小鼠中，复制驱动的HBV cccDNA丢失

《Journal of Virology》：Replication-driven HBV cccDNA loss in chimeric mice with humanized livers

本研究通过人肝化uPA/SCID小鼠模型，揭示HBV持续感染中cccDNA的动态清除机制。结果显示，感染后期cccDNA积累停滞，单细胞分析发现27%-55%的HBsAg阳性细胞未检测到cccDNA但存在rcDNA，表明cccDNA可能通过非细胞毒性机制自发清除，且病毒再感染可维持cccDNA动态平衡。临床相关性发现cccDNA清除与肝损伤无关，正常ALT水平支持非细胞毒性清除机制。这些发现为靶向cccDNA再生而非直接清除cccDNA的治疗策略提供了依据。

　　这项研究聚焦于乙型肝炎病毒（HBV）感染过程中，如何在保持感染的同时避免细胞损伤。HBV感染通常依赖于共价闭合环状DNA（cccDNA）的形成，并可以表现为短暂或持续性感染。持续性感染需要非细胞毒性病毒表型，这主要通过限制病毒在受感染细胞中的复制来实现。研究人员使用了人类化肝脏的uPA/SCID嵌合小鼠模型，以探讨HBV在感染过程中如何在持续复制的同时避免细胞毒性效应。

通过分析HBV的复制动力学，研究人员发现，感染后的早期阶段中，病毒产物的积累呈现出持续增长的趋势，直到感染达到峰值。然而，在感染的持续阶段，这种积累停止增加，这可能是由于病毒复制受到了抑制。进一步的检测显示，cccDNA在细胞内的水平在持续感染阶段并未显著下降，但在单细胞和单核水平上却显示出未检测到的情况。这表明cccDNA可能在某些受感染细胞中被自发清除，从而在根部阻止了HBV的复制，避免了潜在的细胞毒性后果。

研究还指出，cccDNA的清除并非由直接的病毒复制抑制或细胞死亡导致，而可能是通过某种非细胞毒性机制进行的。这种自发清除的现象与临床观察一致，即在慢性HBV感染中，cccDNA会经历频繁的清除和替换。这为HBV感染的持续性提供了一种新的解释，即cccDNA的持续存在依赖于其持续的补充，而不是其本身的稳定性。

在HBV感染过程中，细胞内的病毒RNA水平始终保持较高，这表明cccDNA仍然在持续地进行转录。尽管如此，cccDNA的水平却在某些细胞中无法检测到，这提示cccDNA可能在某些情况下被清除。这一发现进一步支持了cccDNA的动态特性，即其并非在所有细胞中都稳定存在，而是可能在某些细胞中被清除，从而停止病毒复制。

此外，研究人员还观察到，尽管病毒复制在受感染细胞中持续，但细胞内的病毒蛋白合成并未显著下降，这表明HBV的复制抑制可能主要发生在cccDNA水平。在分析中，研究人员还发现，cccDNA的清除可能与细胞分裂或病毒复制过程中的某些因素有关，而非直接的细胞毒性。

研究的局限性在于无法准确估计cccDNA清除的百分比，这可能受到细胞损伤和自发细胞周转的影响。未来的研究需要进一步探讨非复制相关因素，如自然的肝细胞更新和增殖，对cccDNA水平变化的贡献。此外，研究还强调了单细胞分析的重要性，因为这种方法能够更精确地揭示cccDNA的动态变化，而不仅仅是整体细胞水平的平均值。

总体而言，这项研究提供了新的视角，表明cccDNA的清除可能是一种自然发生的动态过程，而非仅依赖于直接的抗病毒治疗。这一发现对慢性HBV感染的治疗策略具有重要意义，因为它暗示了通过阻断cccDNA的补充而非直接靶向cccDNA本身，可能是一种更有效的清除cccDNA的方法。这种非细胞毒性清除机制可能为未来开发新的抗病毒疗法提供了理论基础。