双非破坏性放大策略实现了对人体血浆中可溶性TRAIL的超灵敏检测

《Analytical Chemistry》：The Dual Nondestructive Amplification Strategy Realizes the Ultrasensitive Detection of Soluble TRAIL in Human Plasma

纳米抗体-M13噬菌体两阶段信号放大ELISA法实现sTRAIL高灵敏度检测并降低成本

　　

可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（sTRAIL）是癌症、自身免疫性疾病和心血管疾病诊断及预后分层的关键生物标志物。然而，目前血浆中sTRAIL的检测受到商用ELISA试剂盒灵敏度不足和检测成本过高的限制，这阻碍了其在临床上的应用。为了解决这些问题，抗sTRAIL纳米体（Nb93）被非破坏性地展示在M13噬菌体的小 capsid 蛋白pIII上，而噬菌体的大 capsid 蛋白pVIII（每个噬菌体约含有2700个拷贝）被用作支架，与大量HRP结合的抗M13抗体结合，以实现两阶段信号放大并提高检测灵敏度。为了降低成本，传统的PEG/NaCl噬菌体富集步骤被省略；取而代之的是直接使用噬菌体扩增培养的上清液进行检测。这一改进不仅减少了试剂的使用，还节省了时间和劳动力成本。在最佳条件下，所开发的夹心ELISA（使用mAb5B3作为捕获抗体，噬菌体展示的Nb93作为检测剂）对人sTRAIL的检测范围为3.91–250 pg/mL，并具有高特异性。在添加sTRAIL的血浆样本中，其回收率介于91.82%至107.48%之间。对6名心肌梗死患者的临床检测显示，再灌注后sTRAIL水平显著下降，表明预后较差。这项工作提供了一种灵敏且经济高效的sTRAIL检测方法，并为针对低丰度疾病生物标志物的免疫测定提供了一种可推广的放大策略。