综合分析发现，成纤维细胞中的CD276可作为肝母细胞瘤恶性程度的预测因子，并调控中性粒细胞的浸润

《Hepatology Communications》：Integrated analysis identifies CD276 in fibroblasts as a malignancy predictor and regulator of neutrophil infiltration in hepatoblastoma

肝母细胞瘤中CD276的表达与恶性表型及免疫微环境相关，本研究通过bulk RNA-seq和scRNA-seq分析发现CD276在癌症相关纤维母细胞（CAFs）中显著高表达，并与肿瘤转移、预后不良相关。构建了整合CD276水平与临床特征的预测模型，显示CD276是独立的预后风险因子。机制研究表明CD276通过调控CXCL2表达抑制中性粒细胞浸润，并在小鼠模型中证实CD276过表达促进肝癌生长。这些结果为靶向CD276的免疫联合治疗提供了理论依据。

　　肝癌是儿童中最常见的恶性肿瘤之一，其中肝母细胞瘤（Hepatoblastoma）占据了儿童肝癌的大部分病例。近年来，免疫检查点抑制剂的应用在多种癌症治疗中展现出巨大的潜力，成为晚期癌症治疗的重要手段。然而，对于肝母细胞瘤这一疾病，免疫检查点配体的临床意义尚未完全明确，尤其是在理解其对肿瘤微环境的调控机制方面存在诸多挑战。因此，本研究旨在探讨免疫检查点配体CD276在肝母细胞瘤中的表达特征，并评估其作为恶性特征预测因子和中性粒细胞浸润调控因子的潜力。

研究团队采用了多种分析方法，包括对批量RNA测序数据集进行单变量和多变量逻辑回归分析，以评估免疫检查点配体的临床意义，并构建新的预测模型。同时，结合单细胞RNA测序（scRNA-seq）、免疫组织化学（IHC）、去卷积分析和相关性分析，深入研究CD276的表达模式及其对肿瘤免疫微环境的影响。研究结果显示，CD276在肝母细胞瘤组织中的转录水平显著升高，尤其是在具有更具侵袭性恶性表型的患者中更为明显。此外，基于风险评分构建的预测模型和一个用户友好的列线图（nomogram）被开发出来，用于结合CD276水平与临床特征，预测患者的转移风险。通过scRNA-seq和多重免疫组化（mIHC）分析进一步验证了CD276在癌症相关成纤维细胞（CAFs）中的高表达，表明其可能在肿瘤的免疫调节中发挥关键作用。

研究还发现，CD276的表达水平与肝母细胞瘤中的免疫浸润存在显著相关性。通过调控CXCL2，CD276能够影响中性粒细胞的浸润，这提示CD276在肝母细胞瘤恶性进展中可能通过一种潜在的机制发挥作用。此外，通过小鼠模型验证了CAFs中的CD276可以促进肝母细胞瘤的生长，进一步支持了CD276在肝癌进展中的重要性。

在方法部分，研究团队利用公开的RNA测序数据集（GSE131329）和来自上海儿童医学中心的内部数据，结合单细胞RNA测序技术，对肝母细胞瘤样本进行了分析。通过对数据的处理和质量控制，研究人员确认了CD276在肿瘤微环境中的表达模式，并进一步验证了其在CAFs中的显著富集。此外，研究还通过免疫细胞去卷积分析，评估了CD276在肿瘤浸润免疫细胞中的表达情况，并利用统计分析方法验证了其与多种临床特征的关联。

研究结果表明，CD276的表达水平与肝母细胞瘤的恶性程度和转移风险密切相关。通过使用风险评分和列线图模型，研究人员成功构建了一个能够预测肝母细胞瘤患者转移概率的工具。此外，研究团队通过IHC和定量分析，验证了CD276在临床样本中的表达情况，并进一步发现其在转移性组织中的表达显著高于非转移性组织。这些结果不仅强调了CD276在肝母细胞瘤进展中的重要性，也为开发针对该疾病的新免疫治疗策略提供了潜在的靶点。

CD276在免疫系统中扮演着调节免疫细胞功能的关键角色，尤其在调控中性粒细胞浸润方面。研究发现，CD276的表达与CXCL2水平存在显著相关性，而CXCL2是中性粒细胞、单核细胞和自然杀伤细胞（NK cells）迁移的重要因子。通过调控CXCL2，CD276可能影响免疫细胞的招募和浸润，从而促进肿瘤的生长和转移。在小鼠模型中，研究人员进一步验证了CAFs来源的CD276能够增强肝母细胞瘤的形成，并通过免疫组化分析确认了CD276在CAFs中的高表达与CXCL2的低表达及中性粒细胞数量的减少之间的关系。这些发现揭示了CD276可能通过抑制CXCL2信号通路，影响中性粒细胞的趋化性，从而在肝母细胞瘤的恶性发展中发挥关键作用。

研究团队还通过多个实验方法，包括批量RNA测序、单细胞RNA测序和免疫组化，进一步验证了CD276在肿瘤微环境中的表达模式及其对免疫细胞浸润的影响。这些方法帮助研究人员更全面地理解CD276在肝母细胞瘤中的作用机制，并为其作为潜在治疗靶点提供了依据。此外，研究团队还发现CD276与多种免疫细胞的丰度存在显著相关性，包括树突状细胞（DCs）、B细胞、CD8+ T细胞、CD4+ T细胞、巨噬细胞、NK细胞和中性粒细胞。通过这些分析，研究人员进一步明确了CD276在肝母细胞瘤中的免疫调节作用，并揭示了其可能通过影响中性粒细胞的浸润，进而促进肿瘤的生长和转移。

尽管本研究提供了重要的发现，但仍存在一些局限性。肝母细胞瘤的发病率较低，导致样本数量有限，这在一定程度上影响了统计分析的效力。为了克服这一问题，研究团队采用了多队列验证策略，包括GSE151347数据集和内部的批量RNA测序数据，以增强研究结果的可信度。此外，通过结合不同的实验方法，如scRNA-seq和mIHC，研究人员进一步验证了CD276的表达模式及其在肿瘤微环境中的作用。然而，未来仍需更大规模的前瞻性研究来进一步验证这些发现，并探索其在肝母细胞瘤患者中的具体机制。

综上所述，本研究揭示了CD276在肝母细胞瘤恶性进展中的显著相关性。通过构建基于风险评分的预测模型和列线图，研究人员能够更准确地预测患者的转移风险。此外，scRNA-seq和mIHC分析表明，CD276主要在CAFs中高表达，而其表达水平与免疫细胞浸润存在显著关联。通过调控CXCL2，CD276可能影响中性粒细胞的浸润，从而促进肿瘤的生长和转移。这些发现不仅为肝母细胞瘤的免疫治疗提供了新的思路，也为开发更有效的治疗策略奠定了基础。