不同尿液保存方法及防腐剂添加对24小时尿蛋白定量检测的影响

《Frontiers in Medicine》：Influence of different urine preservation methods and addition of preservatives on quantitative detection of 24-h urinary protein

尿蛋白检测中苯酚防腐剂对24小时尿蛋白定量结果的影响研究。通过收集80例阳性尿蛋白样本，在37℃、24-26℃、4℃下分别添加或未添加苯酚防腐剂储存24小时后检测，方差分析显示不同温度及是否添加防腐剂均无显著差异（P>0.05），ROC分析显示AUC值均>0.99，敏感性97.4%，特异性100%。结论：室温储存无需苯酚防腐剂即可保证检测准确性，简化操作流程。

　　24小时尿蛋白定量检测是评估肾脏功能、诊断肾脏疾病和监测治疗效果的重要指标之一。通过收集患者24小时内全部尿液并准确测量其中蛋白质的总量，可以更全面地反映肾脏对蛋白质的滤过与重吸收功能，避免因单次尿液浓缩或稀释而导致的误差。蛋白尿是指尿液中蛋白质含量异常升高的一种病理现象，而在健康人群中，尿液中仅含有微量蛋白质，其24小时排泄量通常低于150毫克。当尿液中蛋白质含量超过这一范围，或者随机尿液中的蛋白/肌酐比值高于200毫克/克时，即被定义为蛋白尿。蛋白尿与肾脏疾病密切相关，不仅是肾脏损伤的标志，还可能加速肾脏损伤的进程。因此，24小时尿蛋白检测被视为评估肾功能的“金标准”。其检测结果对疾病的诊断、预后判断以及治疗方案的制定具有重要价值。然而，由于尿蛋白的排泄量不稳定，且尿液中含有多种物理和化学成分，因此在尿液样本的采集和保存过程中，选择合适的方法至关重要。

在尿液样本的保存方法上，通常采用冷藏和化学防腐剂处理两种方式。化学防腐剂的作用是通过抑制细菌的生长来保持尿液的稳定性。常见的防腐剂包括甲苯、二甲苯、硼酸、盐酸和麝香草酚等。其中，甲苯和二甲苯因其在尿液化学成分的定性和定量分析中广泛应用，成为蛋白尿检测中最常用的防腐剂。二甲苯能够形成一层物理屏障，阻止空气中的细菌进入尿液样本，从而有效抑制细菌繁殖。在推荐剂量下，它不会干扰检测方法，例如偶氮法。然而，二甲苯也存在一些缺点，例如具有致癌性、剂量难以精确控制，以及可能对样本的吸收产生影响。因此，尽管二甲苯在临床中被广泛使用，但其潜在的健康风险和操作难度仍然引发了对其使用必要性的关注。

本研究旨在探讨在不同保存温度条件下，添加二甲苯是否会对24小时尿蛋白定量检测结果产生显著影响。研究共选取了80份尿蛋白阳性样本，分别在37°C、24–26°C（室温）和4°C的条件下进行保存，并同时设置对照组，以确保检测结果的准确性。研究过程中，所有样本在采集后均进行了离心处理，以去除沉淀物，确保检测的均匀性和可靠性。检测方法采用的是邻苯二胺红-钼酸盐法，这是一种基于酸性条件下邻苯二胺红与钼酸盐形成红色复合物的显色反应，其最大吸收峰位于467纳米。当该复合物与尿液中的蛋白质结合时，其分子结构发生变化，吸收峰会移至594–600纳米，此时吸收值与蛋白质浓度呈线性关系。通过与标准蛋白溶液进行比色分析，可以定量测定尿液中的蛋白质含量。

研究结果表明，在37°C、24–26°C和4°C的条件下，无论是否添加二甲苯，24小时尿液中的蛋白质浓度均未出现显著差异。这一结果意味着，即使不使用防腐剂，尿液样本在不同温度下的保存仍然能够保持较高的检测准确性。此外，通过受试者工作特征（ROC）曲线分析，研究进一步验证了在各种保存条件下，二甲苯的添加与否对检测结果的准确性影响极小。ROC曲线的曲线下面积（AUC）值在所有条件下均保持在0.992至0.994之间，表明检测方法具有极高的敏感性和特异性。特别是在4°C保存且未添加二甲苯的样本中，特异性达到了100%，而敏感性则保持在97.4%的高水平，与直接检测的对照组结果几乎一致。

这一发现具有重要的临床意义。首先，它表明在多种保存条件下，不使用二甲苯进行尿液保存是一种安全、简便且可行的方法。这不仅简化了实验前的处理流程，还避免了因使用二甲苯可能带来的健康风险和技术难题。其次，该研究的结果为临床实践中寻找更合适的尿液保存方法提供了理论依据。在实际操作中，尿液样本的保存时间往往受到各种因素的影响，例如设备故障、样本运输延迟等。因此，如果能够确保在室温下保存24小时尿液样本而不影响检测结果，将极大提升临床检测的便利性和可行性。

此外，研究还指出了当前尿液保存方法的一些局限性。例如，研究未包括微量白蛋白尿的样本，因此其结论在某些特定应用场景（如糖尿病肾病的早期筛查）中可能不适用。未来的研究需要结合高灵敏度检测技术，进一步评估二甲苯对尿液样本的干扰情况。同时，研究未对不同剂量的二甲苯对尿液稳定性、离心效果以及检测干扰进行系统分析，因此无法明确剂量与检测性能之间的关系。未来的研究应深入探讨二甲苯的剂量效应，以提供更精确的临床防腐剂选择建议。此外，研究未实时监测尿液保存过程中的温度变化，这可能导致对极端温度波动（如断电或设备故障）对检测结果的影响估计不足。因此，未来研究可以结合智能温控记录技术，以进一步验证非理想条件下的样本保存可靠性。

研究还指出，细菌生长是尿液样本保存过程中需要关注的重要因素。防腐剂的使用可以有效抑制细菌繁殖，防止细菌分解尿液中的蛋白质和其他成分，从而确保检测结果的准确性。然而，本研究未对样本中的细菌数量进行检测，也未分析不同保存条件下细菌的生长情况，这在一定程度上削弱了研究结论的可信度。未来的研究应增加细菌计数检测项目，通过微生物培养等方法，全面评估不同保存条件下细菌的生长情况及其对尿蛋白保存稳定性的影响。

同时，研究在统计分析方面也存在一定的不足。例如，未进行真正的患者级重复分析，这使得无法准确评估个体差异对检测结果稳定性的影响。患者级重复分析能够更好地反映样本在不同时间点或不同条件下的稳定性，有助于更精确地评估保存方法的有效性和可靠性。因此，未来的研究应加强患者级重复分析，采用更科学合理的统计方法，充分考虑个体差异对研究结果的影响，以提升研究的科学性和实用性。

另外，研究还指出，尿液中的细菌数量和pH值是影响尿液质量的重要因素。这些参数会随着时间变化而波动，进而影响尿蛋白的稳定性。然而，本研究未对这些参数随时间的变化情况进行监测和分析，因此无法确认不同保存条件下（有或无防腐剂）这些指标的变化及其对尿蛋白保存的影响。未来的研究应加强对细菌数量和pH值随时间变化的监测与分析，以全面了解这些指标与尿蛋白稳定性之间的关系，从而为优化样本保存方法提供更详尽的依据。

综上所述，本研究的数据显示，不使用二甲苯作为防腐剂，对24小时尿蛋白定量检测的准确性没有显著影响。这一结论得到了ROC分析的有力支持，表明在多种保存温度条件下，尿液样本的保存方法可以更加灵活和多样化。因此，直接在室温下保存24小时尿蛋白样本是一种安全、简单且可靠的检测方法，适用于广泛的临床实践。未来的研究应进一步拓展样本保存时间的观察范围，全面评估不同保存时间对尿蛋白稳定性的影响，从而为临床提供更加全面和系统的样本保存指导。同时，应加强对细菌生长、pH值变化以及剂量效应等关键因素的深入研究，以确保尿液样本在各种条件下的稳定性和检测结果的准确性。