红细胞作为探针，用于测定脂质体佐剂制剂中的游离QS21含量，以保障产品的安全性和稳定性

《Analytical Methods》：Red blood cells as probes for determining free QS21 in liposomal adjuvant formulations to support product safety and stability

检测脂质体佐剂中游离QS21的红细胞溶血法及验证

　　QS21作为一种高效的佐剂，在多种疫苗开发中扮演着重要角色。它被广泛应用于儿童疟疾疫苗RTS,S/AS01E（也称为Mosquirix）、老年带状疱疹疫苗gE/AS01B（Shingrix）以及成人呼吸道合胞病毒疫苗RSVPreF3-AS01E（AREXVY）中。然而，QS21本身具有一定的毒性和溶血性，尤其是在作为游离形式存在时。因此，为了确保其在疫苗中的安全性，研究人员致力于开发能够有效区分游离QS21与结合QS21的分析方法。在脂质体配方中，QS21通常被包裹在含有胆固醇的异质基质中，以抑制其毒性作用。然而，目前尚无可靠的定量方法能够准确识别脂质体中游离QS21的存在。

基于此，研究团队开发了一种基于红细胞（RBCs）的检测方法，用于评估游离QS21在脂质体佐剂中的含量。该方法利用了RBCs与QS21之间的相互作用，导致溶血，释放出血红蛋白（Hgb），随后通过Drabkin试剂（CMHR）将其转化为更稳定的氰化高铁血红蛋白（CMH），再通过紫外-可见分光光度计（UV-vis）测量其在540 nm波长处的吸光度。这种方法不仅具有良好的特异性，而且不需要昂贵或复杂的仪器，具有中等的通量，适合用于常规的疫苗质量控制和稳定性研究。

在实验过程中，首先对试剂进行了准备，包括CMHR溶液、Triton X-100（Tx-100）溶液、SPBS缓冲液以及不同浓度的Hgb标准溶液。通过系列稀释和紫外-可见光谱分析，建立了Hgb的校准曲线，确保方法的线性范围和检测灵敏度。为了验证方法的特异性，研究人员测试了不同样本矩阵，如纯缓冲液、含有CMHR的缓冲液以及含有ALFQ的样本，确保只有游离QS21与RBCs反应才能释放Hgb，从而避免其他成分的干扰。

此外，方法的准确性与精密度也得到了评估。通过在不同浓度下进行多次重复测量，研究人员确认了该方法在实际应用中的稳定性。同时，对游离QS21的检测限（LOD）和定量限（LOQ）进行了分析，确保方法能够在低浓度下有效检测游离QS21的存在。实验结果显示，该方法在微摩尔范围内具有良好的检测能力，能够满足实际应用的需求。

在实际应用中，该方法被用于检测WRAIR生产的ALFQ疫苗佐剂中的游离QS21含量。通过对不同批次的ALFQ进行测试，研究人员发现所有批次中游离QS21的含量均接近于零，说明该方法能够有效地监控佐剂的稳定性，并确保其在临床试验中的安全性。这种基于RBCs的检测方法不仅适用于ALFQ，还可能适用于其他含有QS21的疫苗佐剂。

通过该方法的开发和验证，研究团队成功建立了适用于疫苗佐剂质量控制的分析流程。该方法不仅能够准确检测游离QS21，还能评估其在不同储存条件下的稳定性，为疫苗的安全性和有效性提供重要支持。研究结果表明，该方法在实际应用中具有广泛的适用性，并且能够满足监管要求，确保疫苗产品的质量和安全性。