推拿针灸通过FoxP3/mTORC1信号通路调节肌萎缩侧索硬化症（ALS）小鼠的Treg免疫抑制现象

《Immunology》：Tui Na Acupressure Modulates Treg Immunosuppression via FoxP3/mTORC1 Signalling in ALS Mice

本研究通过多组学分析揭示推拿疗法可改善肌萎缩侧索硬化症（ALS）小鼠的运动认知功能，其机制在于激活FoxP3/mTORC1信号通路，增加调节性T细胞（Treg）比例，抑制IL-6、TNF-α等促炎因子，减少氧化应激并促进神经修复。通过行为学、流式细胞术、ELISA及蛋白质组学验证，推拿显著上调FoxP3、mTOR、Raptor等关键蛋白表达，抑制凋亡并改善神经炎症微环境。该研究为推拿治疗神经退行性疾病提供了分子机制依据。

　　本研究围绕“Tui Na”这一传统中医疗法在治疗渐冻症（ALS）中的作用展开，探讨其通过调控调节性T细胞（Tregs）的功能，尤其是通过FoxP3/mTORC1信号通路，来改善神经炎症和运动功能的潜力。ALS是一种以运动神经元进行性退化为特征的神经退行性疾病，其病理过程不仅涉及运动功能的丧失，还与认知障碍、自主神经功能紊乱及感觉异常等非运动症状密切相关。近年来，越来越多的研究表明，免疫失调，包括小胶质细胞极化失衡（向M1型转移）和外周Treg细胞功能受损，是导致ALS病理进展的重要因素。因此，探索如何通过非药物手段调节免疫系统，成为缓解ALS症状和延缓疾病进程的新方向。

本研究采用SOD1G93A转基因小鼠作为ALS模型，通过Tui Na疗法在“肾俞”穴位进行干预，评估其对运动功能和认知功能的影响。在实验设计上，研究团队对小鼠进行了分组，包括野生型对照组、ALS模型组、利鲁唑（Riluzole）正对照组、Tui Na干预组、非穴位按摩组和假刺激组。所有实验组均接受不同的干预处理，同时进行每周的体重和运动功能评估。实验过程中，研究团队还通过多种技术手段，包括转录组学、蛋白质组学、流式细胞术、酶联免疫吸附试验（ELISA）、免疫组织化学和Western blot等，全面分析了Tui Na对Treg细胞数量、功能及信号通路的影响。此外，体外实验进一步验证了Tui Na对Treg细胞增殖和免疫抑制能力的促进作用。

研究结果显示，Tui Na干预显著改善了ALS小鼠的运动功能和认知表现。在旋转棒测试中，Tui Na组小鼠在第11、14、16、18和20周时表现出更长的平衡时间，而利鲁唑组也显示出一定的改善趋势，但效果不如Tui Na明显。同时，Tui Na组在尾悬垂测试中，表现出更长的挣扎时间，说明其对肌肉力量和神经协调性具有积极影响。在认知功能评估方面，Tui Na组小鼠在新物体识别测试和Y迷宫测试中，均表现出更优的探索行为和记忆保持能力。这些行为学结果表明，Tui Na可能通过调节免疫系统，有效缓解ALS的神经炎症反应，并对运动功能和认知功能产生保护作用。

进一步的免疫学分析显示，Tui Na干预显著增加了小鼠脾脏、淋巴结和血液中Treg细胞的比例，并促进了这些细胞的增殖能力。同时，Tui Na显著提高了抗炎性细胞因子如IL-10和TGF-β的表达水平，而降低了促炎性细胞因子如IL-6、TNF-α和IFN-γ的水平。这表明Tui Na可能通过增强Treg的免疫抑制功能，改善了免疫失衡状态，从而减轻了ALS的炎症反应。此外，研究还发现，Tui Na显著降低了Treg细胞的凋亡率，并增强了抗氧化能力，如提高超氧化物歧化酶（SOD）活性和谷胱甘肽（GSH）含量，从而减轻了氧化应激对神经细胞的损伤。

在分子机制方面，研究通过转录组学和蛋白质组学分析发现，Tui Na显著激活了FoxP3/mTORC1信号通路。这一通路的激活不仅促进了Treg细胞的增殖，还增强了其免疫抑制能力。研究团队还通过加入FoxP3信号通路抑制剂GSK126和mTORC1通路抑制剂雷帕霉素（Rapamycin），进一步验证了这一机制的可靠性。结果表明，抑制该通路可逆转Tui Na带来的免疫调节效果，从而确认了Tui Na通过这一通路发挥治疗作用。

研究还发现，Tui Na能够显著改善ALS小鼠的神经炎症状态，包括降低促炎性因子表达，提高抗炎性因子水平，以及减少病理蛋白的沉积。通过免疫组织化学和Western blot分析，研究团队发现Tui Na显著增强了FoxP3在脊髓组织中的表达，并降低了SOD1G93A等与ALS病理相关的蛋白水平。这些发现表明，Tui Na可能通过调节Treg细胞的功能，从而影响神经系统的炎症反应，进而对ALS的病理进程产生积极影响。

此外，研究还评估了Tui Na对小鼠脑组织的影响，发现其在海马体和运动皮层中表现出显著的神经保护作用。通过HE染色和尼氏染色，研究团队观察到Tui Na组小鼠的神经元形态良好，细胞密度较高，而ALS模型组则表现出明显的神经元损伤。这进一步支持了Tui Na对脑组织的保护作用。同时，研究还发现，Tui Na能够显著降低氧化应激标志物如MDA的水平，并提高SOD活性，从而增强抗氧化能力，缓解氧化损伤对神经细胞的破坏。

在进一步的机制研究中，研究团队探讨了Tui Na如何通过FoxP3/mTORC1信号通路调控Treg细胞的功能。体外实验显示，Tui Na显著增强了Treg细胞的增殖能力，并提升了其对效应性T细胞（Teff）的免疫抑制作用。同时，Treg细胞中CTLA-4和IL-2RA等关键免疫调节分子的表达水平也显著增加，而使用FoxP3或mTORC1抑制剂则显著削弱了这些效应。这些结果表明，Tui Na可能通过激活FoxP3/mTORC1通路，增强了Treg细胞的免疫调节能力，从而在神经退行性疾病中发挥积极作用。

研究还指出，Tui Na的治疗效果依赖于特定的刺激参数，如施加的力度和频率。在实验中，Tui Na的施压强度控制在约10磅，频率为每分钟200次，这些参数的标准化对于确保治疗效果至关重要。此外，研究团队强调了Tui Na的临床转化潜力，认为其作为一种非药物干预手段，具有在ALS及其他由免疫异常驱动的神经退行性疾病中的应用前景。然而，研究也指出了一些局限性，例如动物模型与人类疾病的差异，治疗参数的标准化问题，以及临床验证的需要。

在讨论部分，研究团队还提到，Tui Na可能通过多条信号通路发挥治疗作用，例如通过调控CX3CL1/CX3CR1轴促进小胶质细胞向M2型极化，从而减轻神经炎症。此外，Tui Na还可能通过影响内源性大麻素系统（eCB系统）中的CB2受体，进一步增强其免疫调节作用。然而，研究也指出，尽管Tui Na在体外和动物模型中表现出良好的治疗效果，但其在人类中的应用仍需进一步验证，特别是在安全性方面，例如是否存在过度免疫抑制的风险，可能导致机会性感染或肿瘤免疫监视能力下降。因此，研究建议在临床应用中采用间歇性治疗方案，以平衡疗效与安全性。

总体而言，本研究为Tui Na在ALS治疗中的应用提供了坚实的科学依据，并揭示了其通过调控Treg细胞功能和FoxP3/mTORC1信号通路，改善神经炎症和神经保护的机制。这些发现不仅拓展了我们对Tui Na治疗作用的理解，也为未来开发基于免疫调节的非药物疗法提供了理论基础和潜在靶点。同时，研究还强调了将传统疗法与现代医学相结合的重要性，认为这将有助于推动神经退行性疾病的综合治疗策略的发展。未来的研究应进一步探索Tui Na在不同疾病阶段的适应性，以及其在人类中的实际应用效果，从而为ALS患者提供更加安全和有效的治疗选择。