《Journal of Thrombosis and Haemostasis》：VWF-T441N, a novel missense variant in the VWF D2 domain, exhibits impaired multimerization and deformed Weibel-Palade bodies
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血管性血友病VWFpropeptide基因T441N杂合突变导致多聚化异常及假Weibel-Palade小体形态改变，正常等位基因可部分 rescue表型，为理解VWFpropeptide变异的表型异质性提供机制证据。
冈本修一（Shuichi Okamoto）|田村昌吾（Shogo Tamura）|铃木淳夫（Atsuo Suzuki）|铃木信明（Nobuaki Suzuki）|金松武（Takeshi Kanematsu）|铃木奈绪子（Naruko Suzuki）|富田雅（Masashi Tomita）|早川文彦（Fumihiko Hayakawa）|胜见昭（Akira Katsumi）|清井仁（Hitoshi Kiyoi）|小岛哲彦（Tetsuhito Kojima）|松下忠（Tadashi Matsushita）
日本名古屋大学医学研究生院综合健康科学系细胞与遗传科学分部
摘要
背景
冯·威勒布兰德因子（VWF）的前体肽（VWFpp）位于前体VWF的D1-D2结构域中，对VWF的多聚化及细胞内储存至关重要。VWFpp的致病性变异会导致多种类型的冯·威勒布兰德病（VWD），如1型、2A型、2N型和3型。在这些变异的杂合子中，来自正常等位基因的VWFpp可以纠正纯合子所表现出的异常现象。这种“挽救”效应可能揭示了杂合子与纯合子之间的表型差异。
目的
我们研究了一种新的VWFpp错义变异体VWF c.1322 C>A (p.T441N)的分子致病机制，该变异体在一个20岁的杂合女性患者中被发现。
方法
通过全外显子测序和Sanger测序分析了VWF基因。在HEK293细胞中过表达了重组VWF（rVWF）和VWF前体肽（rVWFpp）。使用内部开发的酶联免疫吸附试验和多聚体分析方法检测了rVWF的产量。通过免疫细胞化学技术观察了伪Weibel-Palade小体（WPBs）以及内皮细胞集落形成细胞（ECFCs）中的WPBs的形态。
结果
患者的血浆中VWF抗原水平处于正常范围内，但VWF的瑞斯托菌素辅因子活性略有下降（0.38 IU/mL），高分子量和中等分子量的VWF多聚体也有所减少。患者来源的ECFCs中的伪WPBs呈现缩短且圆形化的特征。通过将野生型rVWFpp共表达在单独的载体上，部分纠正了这些异常现象。
结论
VWF-T441N变异会导致VWF的多聚化能力受损以及WPBs形态异常。在VWF-T441N的杂合子中，来自正常等位基因的VWFpp可以部分纠正这些异常。观察到的这种“挽救”效应为理解VWFpp变异体的表型异质性提供了进一步的见解。
