公羊精浆中的细胞外囊泡：将调节精子获能的因素运输并传递给精子

《Biology of Reproduction》：Extracellular vesicles in ram seminal plasma: transport and transfer of capacitation regulating factors to sperm

精子生理功能调控相关蛋白通过公羊精液外泌体传递机制研究，采用超速离心、尺寸排阻色谱及聚乙二醇沉淀三种方法分离精液外泌体富集组分，评估其产量、形态、蛋白谱及功能。结果显示尺寸排阻色谱第二组分（P2）形态最佳且低聚，蛋白谱富集小分子量蛋白（如RSVP20和RSVP14），且能靶向精子中段、头部及顶体后区域传递蛋白，验证外泌体介导的定向蛋白传递机制，为生殖生物技术优化提供新思路。

　　

摘要

在哺乳动物中，精液浆是一种包围精子的复杂液体，由男性生殖道的分泌物组成。它在调节精子功能方面起着关键作用，但目前尚不清楚调控精子生理功能的成分是自由移动的，还是存在于生殖道和附属腺体分泌的细胞外囊泡中。本研究评估了三种分离公羊精液浆细胞外囊泡（SP-EVs）的方法：超速离心（UC）、尺寸排阻色谱（SEC）和聚乙二醇沉淀（PEG），并从产量、形态、蛋白质谱和功能等方面评估了这些方法的效率。Western blot检测证实了这些囊泡中存在特异性标记物（CD9、CD63、HSP70），且细胞质和脂蛋白污染极少。SEC方法，特别是第二级分离物（P2），得到的SP-EVs具有稳定的形态、较低的聚集程度，并且富含低分子量蛋白质，这些蛋白质与大多数调节精子获能的因子相关。相比之下，UC和PEG方法导致的颗粒浓度和聚集程度较高。通过CFSE标记SP-EVs，发现所有制备的囊泡都能与精子发生特异性结合，且结合部位主要位于精子的中段、头部和顶体后区域。此外，Western blot分析表明SP-EVs能够将精子蛋白（RSVP20和RSVP14）转运到精子上，其中RSVP20的转移效率最高（尤其是来自P2级分离物的囊泡）。尽管在SP-EVs中检测到了SPINK3蛋白，但其并未被转移到精子上，这表明存在选择性蛋白质转运现象。这些发现有助于理解精液浆细胞外囊泡对精子的作用，对于提高生殖生物技术的效率具有重要意义，因为这些富集的SP-EVs能够将功能性蛋白质传递给精子。

图形摘要

在新标签页中打开 下载幻灯片