3,9-二-O-甲基尼索林通过RIPK2介导的NF-κB通路抑制作用来延缓胃癌进展

《Biocell》：3,9-Di-O-Methylnissolin Inhibits Gastric Cancer Progression by the RIPK2-Mediated Suppression of the NF-κB Pathway

四甲基吡嗪（TMP）通过抑制YAP-RIPK1-NF-κB信号通路，同时抑制炎症反应并促进自噬 flux，有效缓解急性胰腺炎（AP）相关细胞损伤和胰腺组织病理改变。研究采用体外AR42J细胞模型和体内大鼠AP模型，结合多组学技术验证了TMP的双重调节作用。

　　急性胰腺炎（AP）是一种严重的消化系统疾病，其主要特征是胰腺组织的炎症反应、胰腺酶异常激活以及伴随的细胞损伤。该病的发生与多种因素相关，如胆结石、酒精摄入、高脂血症等，这些因素会引发胰腺腺泡细胞的钙离子异常升高，进而导致胰酶前体的不正常激活，形成恶性循环，加重病情。随着全球AP发病率的上升，其对患者和医疗系统的负担也日益显著，因此，深入研究其发病机制并寻找有效的治疗策略具有重要的临床意义。

研究发现，四甲基吡嗪（TMP）是一种从中药川芎中提取的生物活性生物碱，具有广泛的药理作用，包括扩张血管、改善微循环、抗炎、抗氧化以及抗凋亡等。尽管已有研究表明TMP在胰腺细胞中具有一定的保护作用，但其在AP中的具体作用机制尚未完全阐明。本研究旨在探讨TMP对AP的保护作用及其潜在的分子机制，特别是其对YAP-RIPK1-NF-κB信号轴的影响。YAP是Hippo信号通路的关键下游效应分子，参与调控细胞增殖、凋亡和分化。在胰腺炎的动物模型中，YAP的过度表达会加重炎症反应并抑制自噬过程。RIPK1作为多功能激酶，调节炎症相关靶点如NF-κB，并影响细胞死亡、炎症和自噬。NF-κB则在炎症反应中起着核心作用，其过度激活会导致促炎因子的大量释放，进一步加剧胰腺损伤。因此，YAP-RIPK1-NF-κB轴在AP的病理过程中具有重要作用，可能是未来治疗的潜在靶点。

本研究采用CER（胆囊收缩素）诱导的AP细胞模型和小鼠模型，系统评估了TMP的保护作用。结果显示，TMP能够剂量依赖性地改善CER诱导的AR42J细胞活力下降、促进细胞增殖和迁移、抑制细胞凋亡，并降低细胞内钙离子浓度。此外，TMP还能显著减少胰酶的异常激活，抑制促炎因子的分泌，如TNF-α、IL-1β、IL-6等，以及NLRP3炎性小体的表达。这些发现表明，TMP在抑制炎症反应和恢复自噬功能方面具有双重作用。

在自噬功能的研究中，使用mRFP-GFP-LC3双荧光系统和LysoTracker Red染色评估了TMP对自噬通量的影响。结果显示，CER处理会导致自噬小体积累，而自噬溶酶体减少，表明自噬通量受阻。然而，TMP的干预能够显著促进自噬小体与溶酶体的融合，增加溶酶体数量，从而恢复自噬通量。此外，Western blot分析显示，CER处理显著上调了p62、Beclin-1、Atg5和LC3的蛋白表达，同时下调了溶酶体标志物LAMP-1的表达。而TMP干预则剂量依赖性地降低了这些蛋白的表达水平，同时显著提高了LAMP-1的表达，进一步验证了TMP对自噬-溶酶体通路的修复作用。

在分子机制方面，研究还通过YAP基因敲低和过表达模型验证了YAP在YAP-RIPK1-NF-κB信号轴中的核心作用。Western blot分析表明，CER处理显著促进了YAP、RIPK1和NF-κB p65的磷酸化，而TMP能够有效抑制这些磷酸化事件。在YAP基因敲低模型中，TMP的保护作用进一步增强，而在YAP过表达模型中，其效果被部分抵消，说明YAP在这一信号轴中起到了关键的调控作用。这表明，TMP通过抑制YAP的磷酸化，进而阻断下游RIPK1和NF-κB的激活，达到抗炎和促进自噬的效果。

在动物模型中，TMP显著改善了胰腺组织的病理变化，包括减轻炎症细胞浸润、降低细胞凋亡率、减少血清中促炎因子和胰酶水平。这些结果不仅验证了TMP在体外实验中的保护作用，也进一步支持了其在体内对AP的治疗潜力。研究还发现，TMP能够显著减少MPO（髓过氧化物酶）阳性细胞的数量，这表明其对中性粒细胞浸润的抑制作用，从而减轻了炎症反应。

综上所述，本研究揭示了TMP通过调控YAP-RIPK1-NF-κB信号轴，有效抑制了AP的炎症反应并促进了自噬通量的恢复，从而减轻了胰腺损伤。这些发现为TMP在AP治疗中的应用提供了新的理论依据，并为开发针对YAP-RIPK1-NF-κB轴的治疗策略提供了参考。然而，本研究仍存在一定的局限性，例如仅基于动物模型和细胞模型，未涉及长期或慢性模型，因此需要进一步的临床验证。此外，对YAP-RIPK1-NF-κB轴上游调控因子的影响以及TMP在不同胰腺炎模型中的保护作用仍需深入研究。未来的研究可以结合更先进的技术手段，如纳米技术，以提高TMP的治疗效果和精准度，为AP的治疗提供更广阔的前景。