关于黎凡特水蛙（Pelophylax bedriagae (Camerano, 1882)）（无尾目：蛙科）分泌物抗菌活性的初步研究

《Recent Advances in Anti-Infective Drug Discovery》：A Preliminary Study on the Antibacterial Activity of the Secretion of the Levantine Water Frog, Pelophylax bedriagae (Camerano, 1882) (Anura:Ranidae)

两栖动物皮肤分泌物中抗菌肽的分离与活性研究首次以土耳其 Levant 水蛙为对象，通过刺激收集皮肤分泌物，BCA 法测得总蛋白含量，Tricine-SDS-PAGE 电泳显示含分子量差异的肽段，琼脂扩散法测得对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌抑制圈分别为21mm 和20mm。研究证实其分泌物具有抗菌活性，为后续HPLC分离和测序奠定基础。

　　

摘要

引言：两栖动物的皮肤承担着许多重要功能，如伪装、离子和水分运输以及气体交换。此外，皮肤在免疫系统中也起着关键作用，能够防止病原体入侵。皮肤中的颗粒腺体分泌的物质具有抗菌特性，有助于阻止有害微生物进入动物体内。本研究旨在测定土耳其分布的Pelophylax bedriagae（黎凡特水蛙）分泌物中的总蛋白含量，并探究其是否具有抗菌性能。在这方面，这是关于Pelophylax物种皮肤分泌物中抗菌肽的首项研究。

方法：研究在土耳其伊兹密尔的荷马山谷进行。由于抗菌肽（AMPs）是物种特异性的，而非性别特异性的，因此实验中使用了雌雄成体个体，不区分性别。实验所用动物的平均体重为21克。使用专用设备刺激颗粒腺体，收集分泌物进行分析。收集到的分泌物在离心后进行冻干处理，随后通过比色法（BCA法）测定分泌物中的总蛋白含量。通过平板孔扩散实验评估了这些分泌物对大肠杆菌（Escherichia coli）和金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）的抗菌活性。利用Tricine-SDS-PAGE电泳方法分析了分泌物中的肽谱。

结果：平板孔扩散实验显示，这些分泌物对大肠杆菌形成了21毫米的抑制圈，对金黄色葡萄球菌形成了20毫米的抑制圈。Tricine-SDS-PAGE电泳结果显示存在五种不同分子量的肽，其中一种分子量小于5千道尔顿（kDa）。分析结果表明，Pelophylax bedriagae的分泌物具有抗菌性能，并且在其分泌物中鉴定出多种不同分子量的蛋白质。

讨论：目前文献中尚无关于Pelophylax bedriagae皮肤分泌物的相关研究。不过，已有研究针对另一种Pelophylax物种Pelophylax ridibundus的皮肤分泌物进行了抗菌活性分析。该研究通过平板孔扩散实验检测了其分泌物对某些革兰氏阳性和革兰氏阴性细菌的抗菌作用，结果显示大肠杆菌形成了21毫米的抑制圈，金黄色葡萄球菌形成了24毫米的抑制圈。

结论：本研究仍处于初步阶段，未来的研究中可以通过高效液相色谱（HPLC）等色谱方法分离皮肤分泌物中的抗菌肽，并对其序列进行详细鉴定。